氧化应激诱导ε-dA加合物生成促进HCC的发生
发布时间：2020-06-10 05:47
【摘要】：引言： 氧化应激与多种恶性肿瘤的发生有关，大量研究表明它是慢性乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染、酒精、金属蓄积（如铁、铜）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）等不同病因导致肝细胞癌（HCC）发生的共同机制，氧化应激诱导的ε-dA加合物过多生成可能促进慢性肝脏疾病患者HCC的发生。 目的： (1)检测HCC及邻近癌旁肝组织的氧化应激状态； (2)检测对照肝组织、邻近癌旁肝组织及HCC组织中ε-dA的表达； (3)评估ε-dA与p53蛋白表达的关系； (4)评估癌旁肝组织中ε-dA的表达是否与肝脏的炎症活性和纤维化程度有关。 方法： 对32例HCC患者的HCC组织和（或）癌旁肝组织的总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（SOD）活力、还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）等氧化应激指标进行检测；用免疫组织化学方法检测对照肝组织、癌旁肝组织和HCC组织中ε-dA、p53蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达；对癌旁肝组织进行炎症和纤维化评分。 结果： HCC组织的T-AOC和总SOD活力均低于癌旁肝组织（p＜0.05vs.p＜0.0001），但HCC组织的GSH和MDA含量与癌旁肝组织无明显差异；ε-dA在HCC组织中的阳性表达率明显高于对照肝组织（47.6±20.6%vs.7.9±7.5%，p＜0.0001）和癌旁肝组织（47.6±20.6%vs.29.4±15.8%，p＜0.001）；HCC组织的T-AOC、总SOD活力和ε-dA的表达均与肝癌细胞分化程度有关；HCC组织中ε-dA与p53蛋白的表达有明显相关性(r=0.5162,p＜0.01)；癌旁肝组织中ε-dA的表达与肝脏的炎症活性及纤维化程度有关；HCC组织中PCNA的阳性表达率（47.6±10.9%）显著高于癌旁肝组织（34.1±8.2%，p＜0.0001）和对照肝组织（25.8±7.7%，，p＜0.0001）。 结论： 氧化应激诱导ε-dA加合物的过多生成，它可能通过诱导p53蛋白突变、促进细胞恶性增殖，进而促进HCC的发生；ε-dA加合物可以在慢性肝炎和肝纤维化"肝硬化组织中持续积聚，这可能增加具有癌变倾向的慢性肝脏疾病患者HCC的发生风险。
【图文】：
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文肪酸 反 应， 生成 脂 质过 氧 化产 物 （如 4- H NE 、M D A） ， 4- H NE 与脱 氧 腺苷 、 脱氧 胞 苷 反 应生 成ε - DN A 加 合 物ε - dA 和ε - dC [8 ]。在 大 肠杆 菌 和哺 乳 动物 细 胞( 如 猿猴 肾 细胞 ) 中的 研 究发 现 [9 ] ，ε - DN A 加合 物 具有 高 度 的 致突 变 特 性（ 如 诱 导 p5 3 突 变） ，主 要 引起 碱 基 对 替换 突 变。 例 如 ， ε - dA 可 以 引 起A T →G C 转 换突 变 、A T →T A 和A T → CG 颠 换突 变 [1 0 ,1 1 ] ；ε- dC 可以 引 起C G →T A 转换 突 变 、C G →A T 颠 换突 变 [1 2 ,1 3 ]。将 ε - dA 整 合 到H e La 细胞 、 29 3细 胞 （ 人 胚 肾上 皮 细胞 ） 及 大 肠癌 H C T 1 1 6 细胞 的 任意 一 条D N A 单 链中 ，都 可 以 观 察到 相 似的 突 变， 而 且在 He La 细 胞 中ε - dA 比 8- 氧 -脱 氧 鸟苷 （ 8- o xo - dG ， 一种 氧 化 性 DN A 损 伤 标记 物 ） 具有 更 强的 致突 变 能 力 [ 1 4] 。这 些 突 变可 以 增 加 基因 组 的 不 稳定 性 ， 对恶 性 肿瘤 的 发 生具 有 促 进作 用 [1 5] （见 图 1） ， 这 可 能 是氧 化 应激 促 进H C C发 生 的重 要 机制 之一 。
枸橼 酸 钠缓 冲 液（ 0 .0 1M ，p H 6 .0 ） 的 配 制 ：枸 橼 酸三 钠 3g ， 柠 檬 酸 0. 4g ， 双 蒸 水 1L ，充分 混匀 。 3． 病 理 学 染 色 及 评 分通过 HE 染 色和 M a s so n染 色 对组 织 标 本进 行 病理 学分 析 。根 据H C C 的 病理 分 化 程 度， 将 肿 瘤分 为 2 组 [1 9] ：组 Ⅰ 包 括高 分 化、 高 - 中 分 化 和中 分 化 ，组 Ⅱ 包 括中 - 低 分化 和 低分 化 。另 外， 根 据D e s me t 慢性 肝 炎 评 分系 统 对癌 旁肝 组 织的 炎症 活 性和 纤维 化 程 度 进行 评 分 [2 0] （见 图 2 ）。 炎 症 评分 （ A） 如 下 ： 0分 ， 轻 微 慢性 肝 炎 ；1 分 ， 轻度 慢 性 肝炎 ；2 分 ，中 度 慢 性 肝炎 ； 3 分 ，重 度 慢 性肝 炎 。肝 纤维 化 评 分 （F ） 如 下 ：0 分 ， 无肝纤 维 化； 1 分 ， 汇 管区 纤 维化 但无 纤 维 间 隔形 成 ；2 分， 汇 管 区 纤维 化 且 有 少量 纤 维 间隔 形成 ； 3分 ， 大 量纤 维 间隔 形成 但 无 肝 硬化 ； 4分 ，肝 硬 化 。 我们 根 据 炎 症评 分 ， 将癌 旁肝 组 织分 为 2 组 ：组 Ⅰ 包括 A0 ＋ A 1 ，组 Ⅱ 包括 A2 ＋ A3 ；根 据 肝纤 维化 评 分 ， 将癌 旁 肝 组织 分 为 2组 ： 组 Ⅰ 包括 F 0 ＋F 1 ＋F 2 ， 组 Ⅱ 包括 F 3 ＋F 4 。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575
本文编号：2705865
【图文】：
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文肪酸 反 应， 生成 脂 质过 氧 化产 物 （如 4- H NE 、M D A） ， 4- H NE 与脱 氧 腺苷 、 脱氧 胞 苷 反 应生 成ε - DN A 加 合 物ε - dA 和ε - dC [8 ]。在 大 肠杆 菌 和哺 乳 动物 细 胞( 如 猿猴 肾 细胞 ) 中的 研 究发 现 [9 ] ，ε - DN A 加合 物 具有 高 度 的 致突 变 特 性（ 如 诱 导 p5 3 突 变） ，主 要 引起 碱 基 对 替换 突 变。 例 如 ， ε - dA 可 以 引 起A T →G C 转 换突 变 、A T →T A 和A T → CG 颠 换突 变 [1 0 ,1 1 ] ；ε- dC 可以 引 起C G →T A 转换 突 变 、C G →A T 颠 换突 变 [1 2 ,1 3 ]。将 ε - dA 整 合 到H e La 细胞 、 29 3细 胞 （ 人 胚 肾上 皮 细胞 ） 及 大 肠癌 H C T 1 1 6 细胞 的 任意 一 条D N A 单 链中 ，都 可 以 观 察到 相 似的 突 变， 而 且在 He La 细 胞 中ε - dA 比 8- 氧 -脱 氧 鸟苷 （ 8- o xo - dG ， 一种 氧 化 性 DN A 损 伤 标记 物 ） 具有 更 强的 致突 变 能 力 [ 1 4] 。这 些 突 变可 以 增 加 基因 组 的 不 稳定 性 ， 对恶 性 肿瘤 的 发 生具 有 促 进作 用 [1 5] （见 图 1） ， 这 可 能 是氧 化 应激 促 进H C C发 生 的重 要 机制 之一 。
枸橼 酸 钠缓 冲 液（ 0 .0 1M ，p H 6 .0 ） 的 配 制 ：枸 橼 酸三 钠 3g ， 柠 檬 酸 0. 4g ， 双 蒸 水 1L ，充分 混匀 。 3． 病 理 学 染 色 及 评 分通过 HE 染 色和 M a s so n染 色 对组 织 标 本进 行 病理 学分 析 。根 据H C C 的 病理 分 化 程 度， 将 肿 瘤分 为 2 组 [1 9] ：组 Ⅰ 包 括高 分 化、 高 - 中 分 化 和中 分 化 ，组 Ⅱ 包 括中 - 低 分化 和 低分 化 。另 外， 根 据D e s me t 慢性 肝 炎 评 分系 统 对癌 旁肝 组 织的 炎症 活 性和 纤维 化 程 度 进行 评 分 [2 0] （见 图 2 ）。 炎 症 评分 （ A） 如 下 ： 0分 ， 轻 微 慢性 肝 炎 ；1 分 ， 轻度 慢 性 肝炎 ；2 分 ，中 度 慢 性 肝炎 ； 3 分 ，重 度 慢 性肝 炎 。肝 纤维 化 评 分 （F ） 如 下 ：0 分 ， 无肝纤 维 化； 1 分 ， 汇 管区 纤 维化 但无 纤 维 间 隔形 成 ；2 分， 汇 管 区 纤维 化 且 有 少量 纤 维 间隔 形成 ； 3分 ， 大 量纤 维 间隔 形成 但 无 肝 硬化 ； 4分 ，肝 硬 化 。 我们 根 据 炎 症评 分 ， 将癌 旁肝 组 织分 为 2 组 ：组 Ⅰ 包括 A0 ＋ A 1 ，组 Ⅱ 包括 A2 ＋ A3 ；根 据 肝纤 维化 评 分 ， 将癌 旁 肝 组织 分 为 2组 ： 组 Ⅰ 包括 F 0 ＋F 1 ＋F 2 ， 组 Ⅱ 包括 F 3 ＋F 4 。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575
【共引文献】
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本文编号：2705865
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