法尼醇X受体对L02细胞脂代谢的影响及机制

发布时间：2020-06-10 12:51

【摘要】： 研究背景 脂肪肝已经成为发达国家和富裕地区慢性肝病的首要病因,在我国是仅次于乙肝病毒的第二位慢性肝病的原因,严重影响国民的健康水平及生活质量,因此,有关脂肪肝的研究始终是一个热点问题。法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)、小异二聚体伴侣分子(small heterodimer partner,SHP)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein-1c, SREBP-1c)属于核受体或核转录因子,其中初级胆酸是FXR的天然激动剂。FXR广泛参与胆汁酸、糖及脂代谢,有可能成为治疗脂肪肝和代谢性疾病的新的靶点;SHP在胆汁酸、糖、脂代谢中也具有重要作用,是脂肪肝发病中的关键调节因子; SREBP-1c参与脂肪生成基因表达的调控;其中SHP是FXR的靶基因,SREBP-1c是SHP的靶基因。本实验采用油酸钠诱导人正常肝细胞珠L02细胞建立脂肪变肝细胞模型、采用FXR激动剂鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)钠盐建立干预模型,动态观察肝细胞脂变过程中FXR、SHP及SREBP-1c表达的变化,从肝细胞水平探讨非酒精性脂肪肝脂质沉积的可能机制,为寻找新的治疗靶点提供实验依据。 方法 1、人肝细胞株L02用含10%胎牛血清的1640培养基常规培养、传代。 2、MTT比色法筛选油酸钠最佳作用浓度和作用时间。 3、实验设立对照组(记为C组)、模型组(加油酸钠,记为F组)和干预组(模型中加入鹅去氧胆酸钠【1】,记为F1组)。 4、细胞内TG含量检测及油红O染色鉴定L02肝细胞脂肪变变化;细胞培养上清ALT、AST含量鉴定细胞损伤变化;RT-PCR、Western Blot检测FXR、SHP、SREBP-1c受体mRNA及蛋白表达变化。 结果 1、L02肝细胞的脂肪变模型建立成功。随着造模时间延长,肝细胞脂肪变程度加重。 1)油红O染色:对照组仅见少量橘红色脂滴;脂变和干预组肝细胞内各时间段都可见明显脂滴,并有不同程度的融合,随着培养时间延长加重;但是,干预组的肝细胞内脂滴较脂变组有所减少(P0.01)。 2)脂变组TG含量在24、48、72h各时间段均比对照组明显增加(P0.01);与脂变组相比,干预组TG含量在24、48、72h时相应时间段均明显降低(P0.01)。 2、各组细胞培养上清ALT、AST变化仅脂变组72小时AST、ALT水平略有升高,各组均无明显差异(P0.05)。 3、各组细胞内FXR、SHP、SREBP-1 c mRNA及蛋白表达的变化与对照组比较,脂变组各时间段的FXRmRNA及蛋白表达均有所下调,但这种差别无统计学意义(P0.05);而SHP、SREBP-1c mRNA及蛋白表达明显上调,并随培养时间延长更明显(P0.01)。在干预组,FXRmRNA及蛋白的表达较脂变组和对照组明显升高,各时间点比较都具有显著性差异(P0.01);SHPmRNA及蛋白表达同步升高(P0.01);SREBP-1c mRNA及蛋白虽然比对照组明显上调(P0.01),但是与脂变组相比显著降低(P0.01)。 结论 1、FXR表达下调与肝细胞脂肪沉积密切相关; 2、促进FXR表达可能通过上调SHP的水平、抑制其靶基因SREBP-1c表达而改善L02细胞脂肪变性; 3、SHP在L02细胞脂肪变性中可能具有双向调节作用; 4、FXR有可能成为治疗脂肪肝的新靶点,FXR激动剂鹅去氧胆酸钠具有明显改善肝细胞脂肪变性的作用。
【图文】：

37附图 1 油红 O 染色观察各组细胞的形态学变化（x400）Figure 1 The accumulation of lipid droplets in the hepatocytes was observed by opticalmicroscopy（x400） after with oil red O staining.A 正常对照组(A1:24h,A2:48h,A3:72h)；B 脂肪变组，24 小时；C 干预组，24 小时； D 脂肪变组，48 小时；E 干预组，48 小时；F 脂肪变组，72 小时；G 干预组，72 小时。A control(A1:24h,A2:48h,A3:72 hour)；B steatosis model，24 hour；C intervention model，24 hour；D steatosis model，48 hour；E intervention model，48 hour；F steatosis model，72 hour；Gintervention model，72 hour。

附图 2 各组 FXR、SHP、SREBP-1c 蛋白的表达Figure 2 Expressio of protein of FXR,SHP and SREBP-1c in each groupA 正常对照组；B 脂肪变组，24 小时；C 干预组，24 小时； D 脂肪变组，48 小时；E 干预组，48 小时；F 脂肪变组，72 小时；G 干预组，72 小时。A control，24 hour；B steatosis model，24 hour；C intervention model，，24 hour；D steatosis model，48 hour；E intervention model，48 hour；F steatosis model，72 hour；G intervention model，72hour。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R575.5

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本文编号：2706316