肝组织细胞内HBV cccDNA、HBV tDNA载量与HBV相关性肝细胞癌关系的探讨
发布时间:2020-06-11 02:10
【摘要】:目的:探讨HBV cccDNA、HBV tDNA在HBV相关性肝细胞癌发生发展中的作用,为临床上原发性肝细胞癌的预防和治疗提供理论根据。 方法:应用荧光定量聚合酶链反应法检测33例慢性HBV感染病人肝穿组织(慢性HBV感染组)、60例HBV相关性肝细胞癌病人癌组织(肝癌组)、及其癌旁组织(癌旁组)肝细胞内HBV cccDNA和HBV tDNA载量,HE染色和免疫组化法定性检测肝细胞HBsAg、HBcAg、炎症活动度和纤维化分级。用SPSS16.0软件统计分析,分别进行肝癌组织、癌旁组织、慢性HBV感染肝组织细胞HBV cccDNA、HBV tDNA与血清HBVDNA的相关分析,比较三种组织肝细胞HBV cccDNA、HBV tDNA、cccDNA/HBV tDNA的差异,分别比较三组肝细胞HBsAg、HBcAg不同表达模式间HBV cccDNA、HBV tDNA载量,进行HBV cccDNA、HBV tDNA载量与炎症活动度和纤维化程度的相关分析。 结果:(1)肝癌组织肝细胞内HBV cccDNA、tDNA载量和血清HBV DNA水平无明显相关(分别为r=0.165、P=0.206, r=0.122、P=0.352);慢性HBV感染组织肝细胞内HBV cccDNA、tDNA载量和血清HBV DNA水平成低度正相关(分别为r=0.356、P=0.042,r=0.496、P=0.003)。(2)癌组织肝细胞内HBV cccDNA、HBV tDNA载量均高于癌旁组织(P=0.000、0.042) ,与慢性HBV感染组没有显著差异(P=0.4、0.446);慢性HBV感染组织中HBV cccDNA、HBV tDNA载量显著高于癌旁组织(P=0.041、0.001)(3)癌组织肝细胞内HBV cccDNA /HBV tDNA值均高于癌旁和慢肝组(P=0.025、0.011),慢性HBV感染组织细胞内HBV cccDNA/HBV tDNA值与癌旁组织无明显差异(P=0.752);(4)4例血清HBV DNA、HBsAg阴性及HBcAb阳性的肝癌患者癌及癌旁组织中均检测到HBV cccDNA的存在,且HBVcccDNA/HBV tDNA值均较高,最高达0.973;(5)肝癌组、癌旁组和慢性HBV感染组肝细胞内HBV cccDNA、HBV tDNA载量在HBsAg、HBcAg不同表达模式间没有明显差异(P值均0.05);(6)肝细胞内HBV cccDNA和HBV tDNA载量与肝组织炎症活动度和纤维化程度没有相关性(P值均0.05)。 结论:(1)HBV病毒复制活跃时,血清HBV DNA与肝细胞HBV cccDNA相应升高。对于肝癌细胞,尽管HBVcccDNA转录rc DNA活性不高,即使血清HBV DNA不能检出,甚至HBsAg阴性,在肝细胞仍可检测到高载量的HBV cccDNA。(2) HBV在肝癌发生中起主要作用的可能是cccDNA而不是rcDNA。(3)HBsAg和HBcAg表达模式反映肝细胞内cccDNA、tDNA的动力学不敏感。(4)肝细胞内HBV cccDNA和HBV tDNA并非导致肝组织病变的直接原因。
【图文】:
图 1-1 HBV cccDNA 标准曲线2.4.3 HBV tDNA 的标准曲线应用质粒标准品制作 HBV tDNA 的标准曲线,反应体系、条同 HBV cccDNA 体系,标准品拷贝数为 109、108、107、106、105所得曲线回归方程式为:Y(CT)=45.717-3.241X,R2=0.995,如1-2 所示:
图 1-2 HBV tDNA 的标准曲线2.4.4 β-2M 标准品的制备及标准曲线取 5μl 肝组织核酸抽提物,加入 20μl 的反应体系中。反应条件为:94 ℃ 3min;94 ℃ 30s、54℃ 30s、72℃ 1min共35个循环;72 ℃ 5min。反应所得PCR液使用TIANGEN普通PCR产物纯化试剂盒进行纯化,按说明书操作。取 5μl 纯化产物溶于 45μl 去离子水中。用紫外线分光光度计检测,取 OD260 值,,计算出浓度,并做成系列梯度的标准品,浓度(copies/μl)分别为:109、108、107、106、105。制作 β-2M 标准曲线,所得曲线回归方程式为:Y(CT)=42.32-3.415X,R2=0.996,如图 1-3 所示:
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R735.7;R512.62
本文编号:2707222
【图文】:
图 1-1 HBV cccDNA 标准曲线2.4.3 HBV tDNA 的标准曲线应用质粒标准品制作 HBV tDNA 的标准曲线,反应体系、条同 HBV cccDNA 体系,标准品拷贝数为 109、108、107、106、105所得曲线回归方程式为:Y(CT)=45.717-3.241X,R2=0.995,如1-2 所示:
图 1-2 HBV tDNA 的标准曲线2.4.4 β-2M 标准品的制备及标准曲线取 5μl 肝组织核酸抽提物,加入 20μl 的反应体系中。反应条件为:94 ℃ 3min;94 ℃ 30s、54℃ 30s、72℃ 1min共35个循环;72 ℃ 5min。反应所得PCR液使用TIANGEN普通PCR产物纯化试剂盒进行纯化,按说明书操作。取 5μl 纯化产物溶于 45μl 去离子水中。用紫外线分光光度计检测,取 OD260 值,,计算出浓度,并做成系列梯度的标准品,浓度(copies/μl)分别为:109、108、107、106、105。制作 β-2M 标准曲线,所得曲线回归方程式为:Y(CT)=42.32-3.415X,R2=0.996,如图 1-3 所示:
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R735.7;R512.62
【参考文献】
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1 马艳丽;任万华;主余华;孙宝泉;董振芳;;定量检测乙型肝炎病毒cccDNA的临床意义[J];临床检验杂志;2006年01期
2 马艳丽;任万华;董振芳;主余华;;乙型肝炎病毒cccDNA定量与乙型肝炎临床及病理关系[J];胃肠病学和肝病学杂志;2005年06期
3 周平,张木森,蔡庆,陈友纯,李晓娟,于建国,关键,刘春灵;PCR检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义[J];华人消化杂志;1998年03期
4 Johnny Sze;;HBV cccDNA in patients' sera as an indicator for HBV reactivation and an early signal of liver damage[J];World Journal of Gastroenterology;2004年01期
本文编号:2707222
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