肝组织细胞内HBV cccDNA、HBV tDNA载量与HBV相关性肝细胞癌关系的探讨

发布时间：2020-06-11 02:10

【摘要】：目的:探讨HBV cccDNA、HBV tDNA在HBV相关性肝细胞癌发生发展中的作用,为临床上原发性肝细胞癌的预防和治疗提供理论根据。方法:应用荧光定量聚合酶链反应法检测33例慢性HBV感染病人肝穿组织(慢性HBV感染组)、60例HBV相关性肝细胞癌病人癌组织(肝癌组)、及其癌旁组织(癌旁组)肝细胞内HBV cccDNA和HBV tDNA载量,HE染色和免疫组化法定性检测肝细胞HBsAg、HBcAg、炎症活动度和纤维化分级。用SPSS16.0软件统计分析,分别进行肝癌组织、癌旁组织、慢性HBV感染肝组织细胞HBV cccDNA、HBV tDNA与血清HBVDNA的相关分析,比较三种组织肝细胞HBV cccDNA、HBV tDNA、cccDNA/HBV tDNA的差异,分别比较三组肝细胞HBsAg、HBcAg不同表达模式间HBV cccDNA、HBV tDNA载量,进行HBV cccDNA、HBV tDNA载量与炎症活动度和纤维化程度的相关分析。结果:(1)肝癌组织肝细胞内HBV cccDNA、tDNA载量和血清HBV DNA水平无明显相关(分别为r=0.165、P=0.206, r=0.122、P=0.352);慢性HBV感染组织肝细胞内HBV cccDNA、tDNA载量和血清HBV DNA水平成低度正相关(分别为r=0.356、P=0.042,r=0.496、P=0.003)。(2)癌组织肝细胞内HBV cccDNA、HBV tDNA载量均高于癌旁组织(P=0.000、0.042) ,与慢性HBV感染组没有显著差异(P=0.4、0.446);慢性HBV感染组织中HBV cccDNA、HBV tDNA载量显著高于癌旁组织(P=0.041、0.001)(3)癌组织肝细胞内HBV cccDNA /HBV tDNA值均高于癌旁和慢肝组(P=0.025、0.011),慢性HBV感染组织细胞内HBV cccDNA/HBV tDNA值与癌旁组织无明显差异(P=0.752);(4)4例血清HBV DNA、HBsAg阴性及HBcAb阳性的肝癌患者癌及癌旁组织中均检测到HBV cccDNA的存在,且HBVcccDNA/HBV tDNA值均较高,最高达0.973;(5)肝癌组、癌旁组和慢性HBV感染组肝细胞内HBV cccDNA、HBV tDNA载量在HBsAg、HBcAg不同表达模式间没有明显差异(P值均0.05);(6)肝细胞内HBV cccDNA和HBV tDNA载量与肝组织炎症活动度和纤维化程度没有相关性(P值均0.05)。结论:(1)HBV病毒复制活跃时,血清HBV DNA与肝细胞HBV cccDNA相应升高。对于肝癌细胞,尽管HBVcccDNA转录rc DNA活性不高,即使血清HBV DNA不能检出,甚至HBsAg阴性,在肝细胞仍可检测到高载量的HBV cccDNA。(2) HBV在肝癌发生中起主要作用的可能是cccDNA而不是rcDNA。(3)HBsAg和HBcAg表达模式反映肝细胞内cccDNA、tDNA的动力学不敏感。(4)肝细胞内HBV cccDNA和HBV tDNA并非导致肝组织病变的直接原因。
【图文】：

标准曲线,标准曲线,标准品,曲线回归方程

图 1-1 HBV cccDNA 标准曲线2.4.3 HBV tDNA 的标准曲线应用质粒标准品制作 HBV tDNA 的标准曲线，反应体系、条同 HBV cccDNA 体系，标准品拷贝数为 109、108、107、106、105所得曲线回归方程式为：Y（CT）=45.717-3.241X，R2=0.995，如1-2 所示：

曲线,曲线,标准曲线,紫外线分光光度计

图 1-2 HBV tDNA 的标准曲线2.4.4 β-2M 标准品的制备及标准曲线取 5μl 肝组织核酸抽提物，加入 20μl 的反应体系中。反应条件为：94 ℃ 3min；94 ℃ 30s、54℃ 30s、72℃ 1min共35个循环；72 ℃ 5min。反应所得PCR液使用TIANGEN普通PCR产物纯化试剂盒进行纯化，按说明书操作。取 5μl 纯化产物溶于 45μl 去离子水中。用紫外线分光光度计检测，取 OD260 值，，计算出浓度，并做成系列梯度的标准品，浓度（copies/μl）分别为：109、108、107、106、105。制作 β-2M 标准曲线，所得曲线回归方程式为：Y（CT）=42.32-3.415X，R2=0.996，如图 1-3 所示：
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R735.7;R512.62

【参考文献】