【摘要】：目的:观察二氢杨梅素(Dihydromyrieetin,DMY)对过氧化氢(Hydrogen peroxide solution,H_2O_2)诱导的人正常肝细胞系L02肝细胞氧化损伤的影响及机制,为肝损伤的防治提供新的途径和策略。方法:培养人正常肝细胞系L02肝细胞用于实验,第一步:采用10、20、40、80、160和320μg/m L DMY预处理L02肝细胞24 h后,以H_2O_2(200μmol/L)处理L02肝细胞12 h。光学显微镜观察细胞形态的变化,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法检测细胞活力,比色法测量细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的水平,流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,比色法测量细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平。采用Western blot检测L02肝细胞中内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和C/EBP同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding protein homologous protein,CHOP)的表达。第二步:采用2μg/m L内质网应激诱导剂衣霉素处理LO2细胞30 min后,以80μg/m L DMY预处理L02肝细胞24 h,再以H_2O_2(200μmol/L)处理L02肝细胞12 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法测量细胞培养液中LDH的水平。结果:1、DMY(10、20、40、80、160和320μg/m L)单独处理没有明显影响细胞形态。H_2O_2处理后细胞形态明显改变,大部分细胞呈圆形,部分细胞呈现凋亡形态学特征,染色体聚集在细胞核膜周边,胞浆收缩,细胞变小。40、80、160和320μg/m L DMY预处理改善了H_2O_2诱导的细胞形态变化。2、DMY(10、20、40、80、160和320μg/m L)单独处理与空白对照组比较细胞活力差异没有统计学意义(均P0.05)。与H_2O_2组比较,DMY(40、80、160和320μg/m L)+H_2O_2组细胞的活力增加(均P0.05)。与H_2O_2组比较,DMY(10、20μg/m L)+H_2O_2组细胞活力的差异没有统计学意义(均P0.05)。3、与空白对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率、细胞上清液中LDH水平、细胞中MDA和ROS水平均增加(均P0.05);与H_2O_2组比较,DMY(80μg/m L)+H_2O_2组细胞凋亡率、细胞上清液中LDH水平、细胞中MDA和ROS水平均降低(均P0.05)。4、与空白对照组比较,H_2O_2组细胞中细胞中内质网应激相关相关蛋白CHOP和GRP78表达增加(均P0.05);与H_2O_2组比较,DMY(80μg/m L)+H_2O_2组细胞中CHOP和GRP78的表达下降(均P0.05)。5、与H_2O_2+DMY(80μg/m L)组比较,H_2O_2+DMY(80μg/m L)+衣霉素(2μg/m L)组细胞活力降低(P0.05),细胞凋亡率和细胞培养液上清中LDH活性增加(均P0.05)。结论:DMY通过抑制内质网应激保护H_2O_2诱导的人正常肝细胞L02氧化损伤。
【图文】：
3-4 DMY 和 H2O2对 L02 细胞上清液 LDH 活性的0.05，与空白对照组比较；#P㩳0.05，与 H2O2组2对 L02 细胞中 ROS 水平的影响DMY 预处理 L02 肝细胞 24 h 后，再用 2h。采用流式细胞术检测细胞中 ROS 水平对照组比较，H2O2组细胞中细胞中 ROS DMY+ H2O2组细胞中 ROS 水平降低（P<
3-4 DMY 和 H2O2对 L02 细胞上清液 LDH 活性的0.05，，与空白对照组比较；#P㩳0.05，与 H2O2对 L02 细胞中 ROS 水平的影响MY 预处理 L02 肝细胞 24 h 后，再用 2。采用流式细胞术检测细胞中 ROS 水平照组比较，H2O2组细胞中细胞中 ROSMY+ H2O2组细胞中 ROS 水平降低（P
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R575
【参考文献】
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本文编号：
2707474
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