靶向FoxO1调节内质网应激和坏死性凋亡缓解非酒精性脂肪性肝病的作用及机制研究

发布时间：2020-06-14 15:28

【摘要】：研究背景:非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是导致肝硬化、肝癌的高危因素,但其发病机制未明,故治疗手段有限。近年来发现肝内炎症反应和细胞代谢在NAFLD中发挥重要作用,叉头转录因子O1(Forkhead Box O1,FoxO1)被认为在调节葡萄糖代谢和脂质代谢中起着重要作用。NAFLD进展过程中伴随着内质网应激和坏死性凋亡,然而FoxO1在非酒精性脂肪性肝病中调节内质网应激和坏死性凋亡的关系尚未完全阐明。本实验通过研究FoxO1在非酒精性脂肪性肝病小鼠模型中的作用,并采用体内、外实验、FoxO1抑制剂AS1842856初步探讨FoxO1调节内质网应激及坏死性凋亡缓解NAFLD发展的作用,旨在为NAFLD的治疗寻找新靶点提供新思路。目的:探讨FoxO1对NAFLD内质网应激和坏死性凋亡的影响,靶向抑制FoxO1后缓解NAFLD发生发展的作用及机制研究方法:一、FoxO1在NAFLD发展中的作用研究1、体内实验:构建NAFLD小鼠模型,通过检测血清甘油三酯、血清胆固醇、油红染色和HE染色鉴定NAFLD模型是否构建成功。采用Western Blot检测正常和NAFLD小鼠肝脏中FoxO1和p-FoxO1的表达水平。2、体外实验:构建NAFLD细胞模型:选择人肝癌细胞系HepG2细胞作为研究对象,使用不同浓度的棕榈酸处理培养基,选取最佳浓度培养细胞24h。采用Western Blot检测细胞内FoxO1和p-FoxO1的表达水平。二、内质网应激和坏死性凋亡在NAFLD发展中的作用研究1、体内实验:构建NAFLD小鼠模型,采用Western Blot检测肝脏内内质网应激相关蛋白(PERK、BIP、CHOP)、坏死性凋亡相关蛋白(RIP1、RIP3、p-MLKL)的表达水平。2、体外实验:构建NAFLD细胞模型,采用Western Blot检测细胞内内质网应激相关蛋白(PERK、BIP、CHOP)、坏死性凋亡相关蛋白(RIP1、RIP3、p-MLKL)的表达水平。三、FoxO1调节内质网应激和坏死性凋亡影响NAFLD发展的机制研究1、体内实验:将C57BL/6小鼠分为三组:对照组、高脂饮食组、高脂饮食+FoxO1抑制剂组,16周后通过Western Blot检测小鼠肝脏内质网应激相关蛋白(PERK、BIP、CHOP)、坏死性凋亡相关蛋白(RIP1、RIP3、p-MLKL)的表达水平;电镜观察小鼠肝脏内质网形态。2、体外实验:构建NAFLD细胞模型:1.0umol/L浓度的FoxO1抑制剂AS1842856预处理HepG2细胞2h,用0.75mmol/L浓度的棕榈酸培养HepG2细胞24h;Western Blot检测HepG2细胞总FoxO1和p-FoxO1蛋白,内质网应激相关蛋白(PERK、BIP、CHOP)、坏死性凋亡相关蛋白(RIP1、RIP3、p-MLKL);qRT-PCR检测HepG2细胞内FoxO1下游基因CDKN1B mRNA、PMAIP1 mRNA、BCL2L11 mRNA和TNFSF10 mRNA表达量.结果:1、高脂饮食可使小鼠体重增加,ALT、AST、TC、TG升高,小鼠肝脏脂肪变性,同时肝脏FoxO1激活,磷酸化FoxO1减少。随着棕榈酸浓度升高,HepG2细胞FoxO1表达升高,p-FoxO1表达减少,证明FoxO1参与NAFLD的发生发展。2、高脂饮食可以激活小鼠肝脏内质网应激和坏死性凋亡。随着棕榈酸浓度升高,HepG2细胞内质网应激和坏死性凋亡相关蛋白也表达升高,证明内质网应激和坏死性凋亡参与NAFLD的发展过程。3、抑制FoxO1可以减少小鼠肝细胞内质网应激及坏死性凋亡相关蛋白的表达,内质网损伤减轻。FoxO1抑制剂的使用可以减少HepG2细胞内质网应激和坏死性凋亡相关蛋白表达,FoxO1下游TRAIL mRNA表达减少,证明FoxO1可以调节内质网应激和坏死性凋亡影响NAFLD的发展,这一过程可能通过FoxO1下游靶基因TRAIL介导。结论:在NAFLD小鼠模型中,FoxO1通过加重内质网应激和坏死性凋亡促进NAFLD的进程,靶向抑制FoxO1可通过TRAIL减轻内质网应激、坏死性凋亡逆转NAFLD。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575
【图文】：

图 1 高脂喂养诱导小鼠肝脏脂肪变性。（A）对照组和高脂组小鼠体重增长变化（n=6～8）；（B）对照组和高脂组小鼠肝脏图片；（C）对照组和高脂组小鼠肝重比（n=6～8）；(D～G) 对照组和高脂组小鼠血清 TC、TG、ALT、AST 含量（n=6～8）；（H）对照组和高脂组小鼠肝脏 HE 染色和油红染色。*p＜0.05，**p＜0.005，****p＜0.00005 与对照组相比。

图 2 高脂喂养对小鼠肝脏 FoxO1 表达的影响。（A）Western Blot 检测对照组和高脂组肝脏 FoxO1 和 p-FoxO1 表达情况。（B）定量对照组和高脂组肝脏 FoxO1和 p-FoxO1 表达情况。*p＜0.05，**p＜0.005，与对照组相比。

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈俞乐;;坏死性凋亡调节机制及其分子靶向药物相关研究进展[J];浙江中西医结合杂志;2017年05期

2 韩俊清;薛占贵;;猪坏死性咽炎的治疗[J];当代畜牧;2017年21期

3 杨海玉;刘勇;;中枢神经系统损伤疾病的坏死性凋亡机制研究进展[J];临床与病理杂志;2016年03期

4 周闯;肖海英;李茜;;儿童组织细胞坏死性淋巴结炎1例[J];西北国防医学杂志;2008年03期

5 王付增;程存拴;原云峰;王晓民;;胃壁坏死性穿孔和大面积坏死性瘘18例[J];中原医刊;2006年19期

6 欧阳东,刘延军,雒云;六味地黄丸治疗复发性坏死性粘膜腺周围炎疗效观察[J];北京中医药大学学报(中医临床版);2005年03期

7 王立珍,祖爱春;亚急性坏死性淋巴结炎1例[J];实用儿科临床杂志;2003年11期

8 滕国j;;中药治疗复发坏死性粘膜腺周围炎5例报告[J];现代口腔医学杂志;1987年01期

9 薛恒平;鸡的一种新病毒病—鸡病毒性坏死性肝炎[J];南京农业大学学报;1988年04期

10 朱志超;冰硼散加味治疗坏死性脉管炎[J];四川中医;1988年08期

相关会议论文 前10条

1 郑兰;颜晓勇;;坏死性凋亡与肾脏疾病[A];贵州省医学会肾脏病学分会暨血液净化分会学术年会论文集[C];2018年

2 李伟人;孔豫苏;黄家华;;梭状芽孢杆菌致软组织坏死性感染7例[A];第七届中国医师协会美容与整形医师大会论文集[C];2010年

3 杨欢;颜晓勇;;Kongensin A抑制坏死性凋亡途径在慢性肾脏病中作用的研究进展[A];贵州省医学会肾脏病学分会暨血液净化分会学术年会论文集[C];2018年

4 张秋银;;1例拔牙后并发下行性坏死性纵膈炎患者的术后护理[A];奉献天使心、共筑护理梦：广东省2013年护理学术年会（第四会场）论文集[C];2013年

5 徐恩;詹丽璇;朱新永;卢志伟;李孔平;孙卫文;;坏死性凋亡与脑缺血[A];中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（上）[C];2015年

6 钱文涛;曲璐瑶;;降钙素原及C反应蛋白在下行性坏死性纵隔炎中的预警作用[A];第十四次中国口腔颌面外科学术会议论文汇编[C];2018年

7 张怀亮;许昌春;潘钰蔚;王尚武;黄亚华;林彤;曹春艳;刘倩;黄已清;;突破皮肤表皮自然生长极限-中西医结合重症坏死性变应性血管炎皮肤全层大面积缺损超宽全皮愈合成功诊治案例特别报告[A];中华中医药学会皮肤科分会第四次学术年会;全国中医、中西医结合皮肤病诊疗新进展高级研修班论文集[C];2007年

8 张晓利;刘志勇;张子佳;李颖;;牛传染性鼻气管炎研究进展[A];“转型升级、提质增效、粪污处理、环保生态”科技论文集[C];2015年

9 田晶华;陈创夫;柳建新;盛今良;王鹏雁;王昕鹏;;毛驴皮肤纤维瘤病理组织学观察[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2006年

10 杨川丽;阮锋凯;车琳;张力引;陈圆圆;甘聪玲;陈燕玲;林育纯;林忠宁;;VCP介导Mfn2的线粒体关联性降解在镉诱导SH-SY5Y细胞坏死性凋亡中的作用研究[A];中国毒理学会第七次全国会员代表大会暨中国毒理学会第六次中青年学者科技论坛论文摘要[C];2018年

相关重要报纸文章 前4条

1 潘峰;治坏死性脉管炎[N];民族医药报;2004年

2 山东畜牧兽医职业学院畜牧系 宋钊;鸡坏死性肠类的诊治[N];河北科技报;2007年

3 张忠田 吕军;治愈大面积坏死性巩膜炎[N];健康报;2003年

4 梅艳坤;如何预防羊黑疫[N];北京科技报;2003年

相关博士学位论文 前4条

1 陈松峰;坏死性凋亡在压力诱导的髓核细胞损伤中的作用及其相关机制研究[D];华中科技大学;2016年

2 初晓;细菌核酸诱导滋养细胞死亡及其机制研究[D];吉林大学;2014年

3 王良荣;坏死性凋亡在大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用及Nec-1预先给药对p38 MAPK/NF-κB通路的影响[D];苏州大学;2017年

4 景惠荣;FIAF在肠缺血再灌注多器官损伤中的核心作用研究[D];大连医科大学;2014年

相关硕士学位论文 前10条

1 樊亮;A20对脑外伤后坏死性凋亡的作用及机制研究[D];南京医科大学;2019年

2 唐振霆;靶向FoxO1调节内质网应激和坏死性凋亡缓解非酒精性脂肪性肝病的作用及机制研究[D];南京医科大学;2019年

3 张仕利;动力相关蛋白1(Drp1)-RB轴调控镉诱导肝细胞线粒体依赖性坏死性凋亡[D];厦门大学;2018年

4 祝建华;rhTNFR:Fc对高糖作用下大鼠肾小球内皮细胞坏死性凋亡途径的影响[D];遵义医学院;2018年

5 杨璐菁;Nec-1对高糖作用下大鼠肾小球内皮细胞坏死性凋亡途径的影响[D];遵义医学院;2018年

6 肖夏;抑制坏死性凋亡对单侧输尿管结扎肾脏保护作用的初步研究[D];河北医科大学;2018年

7 刘晓晨;Racl蛋白对肝癌SK-Hepl细胞凋亡及坏死性凋亡通路的影响[D];延边大学;2018年

8 王双;坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1对于脊毮损伤后的内质网应激的影响[D];厦门大学;2017年

9 林佳琼;H_2S通过抑制p38 MAPK/坏死性凋亡通路保护人脐静脉内皮细胞对抗高血糖引起的损伤及炎症[D];南方医科大学;2017年

10 刘晓菲;内质网蛋白Reticulocalbin-1表达下调诱导前列腺癌细胞发生凋亡和坏死性凋亡的研究[D];山东大学;2017年

本文编号：2712985