乙型肝炎病毒相关性肝纤维化组织的比较蛋白质组学研究

发布时间：2020-06-17 09:25

【摘要】： 目的:本文采用差异荧光双向凝胶电泳(DIGE)技术及质谱技术筛选并鉴定乙型肝炎病毒(HBV)相关肝纤维化组织差异表达蛋白质,以期获得肝纤维化早期诊断的分子标志物以及潜在的药物靶标,并为肝纤维化的病理发生机制研究提供思路。 方法:采用DIGE技术筛选Cy3、Cy5及Cy2荧光素标记的肝纤维化及正常肝组织差异表达蛋白质,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)或串联质谱技术进行鉴定并分析,对部分有潜在价值的差异表达蛋白质采用免疫组织化学技术从蛋白质水平进行验证。 结果:共筛选出26个差异表达蛋白质点,其中在肝纤维化组织中15个蛋白质点上调,11个蛋白质点下调;上述26个蛋白差异点采用质谱技术成功鉴定出19种蛋白质。根据蛋白质功能的不同,这些差异蛋白质主要参与氧化应激、分子伴侣、细胞骨架、能量代谢及信号传导等过程;细胞角蛋白8、高迁移组蛋白B1、热休克蛋白70等在HBV相关肝纤维化组织中高表达;硫氧还蛋白过氧化物酶、三磷酸腺苷合成酶、神经多肽h3等在HBV相关肝纤维化组织中低表达。免疫组化验证结果表明肝纤维化组织热休克蛋白70、细胞角蛋白8、高迁移组蛋白B1表达水平均高于正常肝组织,且表达水平随纤维化程度进展而上调,与蛋白质组分析的结果一致。 结论:蛋白质组学技术是筛选HBV相关肝纤维化组织差异表达蛋白质有效方法。发现和鉴定出的部分蛋白质有望成为早期诊断的分子标志物以及潜在药物靶标,同时也为HBV相关肝纤维化的病理机制研究提供了一个新的研究方法系统。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R512.62;R575.2
【图文】：

0500100015002000TCA-丙酮法 Lysis buffer蛋白点数▲图 1.3 两种提取方法 2-D 图谱蛋白点数比较注 ▲与 Lysis buffer 法比较差异显著，P<0.05

二军医大学博士论文 第二部分结 果1 2-D DIGE 扫描结果正常肝组织及 HBV 相关肝纤维化组织分别标记不同荧光染料后进行双向凝胶泳分离，每块 SDS-PAGE 胶用 488nm(Cy2)、532nm(Cy3)、633nm(Cy5) 三种不同波长激光进行扫描，获得内标图谱、正常肝组织图谱、HBV 相关肝纤维化组织图和视觉合成图谱（图 2.1-2.4）。由图中可见大多数蛋白质集中于中性和碱性区域,酸性区域蛋白质斑点较少。

【引证文献】

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本文编号：2717402