PPARγ激动剂在DSS诱导结肠炎小鼠中的作用机制

发布时间：2020-06-19 09:32

【摘要】：研究背景炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一组病因不明的特发性肠道炎症性疾病,其发病率呈现逐年增高趋势,异常的免疫反应在IBD发病过程中起着重要的作用。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferatorsactivated receptor,PPAR)是核激素受体家族中的配体激活受体,PPARγ属于其中一种亚型,主要分布在脂肪组织、肠道、脾脏等处。已有的研究表明PPARγ可以调节炎性因子的表达,促进组织修复,肠道内PPARγ的表达降低可能导致炎症的发生,但其在葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎中的具体作用机制目前尚不十分清楚。目的本实验通过在DSS诱导的结肠炎小鼠体内预防性应用PPARγ激动剂,旨在探究PPARγ激动剂能否抑制Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路,能否影响基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP7)的表达,并调节紧密连接相关蛋白。通过检测血清及组织中相关炎性分子及蛋白的表达,探究PPARγ在实验性结肠炎中的作用。方法SPF级雄性BALB/c小鼠48只,随机分为4组,每组12只。(1)正常对照组:自由进食及饮水,不进行干预。(2)DSS模型组:实验第1~3天自由进食及饮水,同(1)。实验第4天开始自由饮用2.75%DSS溶液(按5ml/只/天的饮水量配置,现配现用),自由进食至实验结束。(3)DSS+NS组:实验第1天开始给与每只小鼠200ul生理盐水(normal saline,NS)灌胃,自由进食及饮水。实验第4天开始自由饮用2.75%DSS溶液,自由进食,继续按相同用量给与该组小鼠生理盐水灌胃,直至实验结束。(4)DSS+RSG组:实验1天开始,给与每只小鼠200ul PPARγ激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RSG)溶液灌胃(20mg/kg/天),自由进食及饮水。实验第4天开始自由饮用2.75%DSS溶液,自由进食,继续按相同用量给与该组小鼠RSG灌胃,直至实验结束。每日监测小鼠体重变化,观察各组小鼠精神状态及大便情况,计算疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分。实验第11天处死全部小鼠,收集血清及结肠组织,ELISA检测血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)水平。结肠组织HE染色后统计组织化学评分(histochemical score,HI),免疫组化法检测结肠组织中TLR4、闭锁小带蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、闭合蛋白(occludin)的表达,Western Blot检测结肠组织中NF-κB、MMP7的表达。结果1.对照组小鼠一般状况良好,体重轻度增加,结肠长度正常。DSS组和DSS+NS组小鼠精神萎靡,一般状况差,体重下降较明显,结肠明显缩短,DAI及HI评分均较对照组明显升高(p0.05),但两个模型组之间差异无统计学意义(p0.05)。DSS+RSG组体重下降及结肠长度缩短均较DSS组和DSS+NS组有所缓解,差异有统计学意义(p0.05),DAI及HI评分也较上述两组降低(p0.05)。2.DSS组及DSS+NS组小鼠血清中TNF-α、IL-6较正常对照组明显增加(p0.05),但两组之间差异无统计学意义(p0.05),与上述两个模型组相比,DSS+RSG组小鼠血清中TNF-α、IL-6水平有所降低(p0.05)。3.免疫组化结果提示,与正常对照组相比,DSS组和DSS+NS组小鼠结肠组织中TLR4表达明显增加,ZO-1及occludin蛋白表达量则有所降低,差异均有统计学意义(p0.05),两个模型组之间上述蛋白的表达无明显差异(p0.05)。与上述两个模型组相比,DSS+RSG组结肠组织中TLR4的表达降低,ZO-1及occludin蛋白表达增加,差异有统计学意义(p0.05)。4.Western Blot结果显示,DSS组及DSS+NS组结肠组织中NF-κB、MMP7的含量均较正常对照组明显升高(p0.05),两个模型组之间无明显差异。DSS+RSG组与上述两个模型组相比,NF-κB、MMP7蛋白的表达均降低(p0.05)。结论1.在DSS诱导的结肠炎小鼠体内,预防性应用PPARγ激动剂可以抑制TLR4/NF-κB信号通路,调节多种炎性因子的表达。2.PPARγ激动剂可以抑制MMP7的表达,改善炎症状态下受损的肠道屏障功能。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R574.62
【图文】：

（2）DSS 组和（3）DSS+NS 组小鼠在饮用 2.75%DSS 溶液 3~4后出现体重下降，精神萎靡，运动量减少，毛发枯燥以及稀便或血便等情况且随着实验进展，上述现象逐渐加重，实验第 10 天开始出现小鼠死亡现象，实验结束DSS组共有1只小鼠死亡，DSS+NS组共有2只小鼠死亡。（4）DSS+R组出现体重下降及大便性状改变较 DSS 组和 DSS+NS 组晚，且体重下降程度及便血等症状也较两个实验组轻，至实验结束未出现小鼠死亡现象。各组小的体重变化情况见图 1.1，DAI 评分见表 1.1。表 1.1 各组小鼠 DAI 及 HI 评分分组 DAI 评分 HI 评分正常对照组 0.67±0.82 0.83±0,75DSS 组 7.83±1.47*5.50±1.87*DSS+NS 组 8.17±1.60*6.00±1.79*DSS+RSG 组 5.33±1.37*#2.67±0.82*#注：*：与正常对照组相比，差异有统计学意义，p<0.05。#：与 DSS 组相比差异有计学意义，p<0.05。

各组小鼠结肠组织学改变及 HI 评分将各组小鼠结肠完全分离后发现，（1）正常对照组小鼠结肠黏膜光滑溃疡等。与正常对照组相比，（2）DSS 组和（3）DSS+NS 组结肠长短，扭曲变形，肠腔内可见血性附着物，同时可见肠黏膜糜烂。（4）DSS肠缩短程度较轻，可见结肠黏膜充血，但程度较模型组轻。具体可见图将组织石蜡切片置于光学显微镜下观察，可见（1）正常对照组小鼠结整连续，腺体及上皮细胞排列规律，隐窝结构完整，未见明显炎性细（2）DSS 组和（3）DSS+NS 组结肠黏膜连续性中断，腺体结构紊乱坏，杯状细胞减少，同时可见大量炎性细胞浸润。（4）DSS+RSG 组重程度较（2）、（3）组轻，镜下可见腺体排列稍紊乱，隐窝破坏较炎性细胞浸润也较上述两组有所好转，具体见图 2.2。依据各组小鼠镜行 HI 评分，具体见表 1.1。Con DSS

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 蒋天从;姚满红;郭璐莹;易建平;韩宝生;戚桂杰;刘英杰;张鸥;;PPARγ基因外显子6多态性与多囊卵巢综合征关系的系统评价[J];中国煤炭工业医学杂志;2016年12期

2 李晨波;张小娟;刘琴;刘丽;沈建芳;;血脂、PPARγ在子痫前期及子痫前期合并胎儿生长受限中的检测及意义[J];南通大学学报(医学版);2016年06期

3 Daniela Rigano;Carmina Sirignano;Orazio Taglialatela-Scafati;;The potential of natural products for targeting PPARα[J];Acta Pharmaceutica Sinica B;2017年04期

4 李腾;李琼;严国强;储佳佳;沈小丹;温见炳;黄起壬;钟荣梅;;人PPARγ基因过表达重组腺病毒载体的构建及鉴定[J];南昌大学学报(医学版);2015年03期

5 胡亚;李东芳;;PPARγ在胃癌中作用的研究进展[J];中国中西医结合消化杂志;2014年05期

6 李强;党诚学;;PPARγ mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌预后的关系[J];实用癌症杂志;2012年01期

7 刘洁琼;梅长林;熊锡山;贾洁爽;付莉莉;;酪氨酸激酶抑制剂对多囊肾病PPARγ的影响研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年01期

8 何英;邬玉辉;;乳腺癌PPARγ和COX-2的表达及临床意义[J];中国现代医学杂志;2011年20期

9 张恒艾;杜冠华;;以PPAR为靶点防治肾脏疾病药物研究进展[J];中国药学杂志;2010年07期

10 Jesse Roman;;Anticancer actions of PPARγ ligands:Current state and future perspectives in human lung cancer[J];World Journal of Biological Chemistry;2010年03期

相关会议论文 前10条

1 ;Genetic polymorphisms of PPAR-γ,HHEX,PTPRD,KCNQ1,and SRR affect therapeutic efficacy of Pioglitazone in Chinese Patients with type 2 diabetes[A];传承与发展，创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年

2 陈刚;林新富;梁继兴;林丽香;沈晓丽;;过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因多态性与老年男性骨质疏松症相关性研究[A];2008中国医师协会内分泌代谢科医师分会年会论文汇编[C];2008年

3 ;Dynamic analysis and ligand binding affinity investigation of PPAR mutations[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年

4 邓悦;李才;赵贤俊;南征;;糖尿病大鼠肾脏PPARγmRNA表达及解毒通络保肾胶囊干预研究[A];第九次全国中医糖尿病学术大会论文汇编[C];2006年

5 王伟铭;章慧娣;刘峰;陈佳韵;陈楠;;PPARγ活化对肾间质成纤维细胞的作用研究[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

6 陈刚;林新富;梁继兴;林丽香;沈晓丽;;过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因多态性与老年男性骨质疏松症相关性研究[A];2008内分泌代谢性疾病系列研讨会暨中青年英文论坛论文汇编[C];2008年

7 齐姗;;PPARγ在类风湿关节炎及其骨质疏松的临床研究[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年

8 Qing Liu;Qi-Ming Yang;Hai-Jun Hu;Li Yang;Ying-Bo Yang;Gui-Xin Chou;Zheng-Tao Wang;;PPAR-γ agonists from the Aerial Parts of Scoparia dulcis[A];第十四届全国中药和天然药物学术研讨会论文摘要[C];2014年

9 李洁;戴爱国;胡瑞成;朱黎明;王梅芳;;PPARγ影响γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性及表达在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

10 ;Endothelial PPARγmediates anti-inflammatory actions of rosiglitazone through dissociation of NF-κB[A];中国生理学会心血管生理学术研讨会论文集[C];2011年

相关重要报纸文章 前1条

1 ;美研究员意外发现癌症新疗法[N];福建科技报;2007年

相关博士学位论文 前10条

1 孙华磊;紫檀芪通过PPARγ通路改善胰岛素抵抗及其作用机制研究[D];郑州大学;2019年

2 穆琼;激活PPARγ对大鼠ICH模型病灶周围脑组织小胶质细胞吞噬能力及CD36表达的影响[D];苏州大学;2018年

3 博庆丽;胎盘PPARγ对细菌脂多糖诱发胎儿死亡的拮抗作用[D];安徽医科大学;2018年

4 赵帅;从天然产物库中筛选PPAR受体激动剂的研究[D];东北林业大学;2017年

5 吴卢进;胰高血糖素样肽-1(GLP-1)通过PPARα改善糖尿病小鼠心肌脂毒性[D];华中科技大学;2018年

6 何金钢;转录因子Twist1在慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为中作用及机制[D];华中科技大学;2017年

7 李有强;PPARγ在铜绿假单胞菌信号分子3-O-C_(12)-HSL阻碍Mo-DCs成熟中的作用[D];广州中医药大学;2017年

8 严瑞;PPARγ调控PTEN/AKT/FAK通路影响糖尿病肾病肾小管间质纤维化的机制研究[D];贵州医科大学;2017年

9 张花治;红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌保护作用及PPARγ/NF-κB信号通路的影响[D];甘肃中医药大学;2017年

10 李优磊;PPAR信号通路在调控猪皮下脂肪与肌内脂肪差异沉积中的作用及机制研究[D];西北农林科技大学;2018年

相关硕士学位论文 前10条

1 王雪;角膜基质细胞通过抑制PPARα的表达促进VEGFr3诱导的角膜新生血管形成[D];厦门大学;2017年

2 甘德强;PPAR-γ激动对创伤性脑损伤后白质的保护作用及机制研究[D];南通大学;2018年

3 宋珂;四妙勇安汤通过激活PPARγ调控相关炎症通路对ApoE~(-/-)小鼠AS肝损伤的影响[D];北京中医药大学;2019年

4 耿丽;PPARγ激动剂在DSS诱导结肠炎小鼠中的作用机制[D];郑州大学;2019年

5 于倩;研究CRL4B~(AhR)介导的底物PPARγ泛素化降解机制[D];山东大学;2018年

6 张雪莹;奶山羊过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)基因启动子转录调控机理研究[D];西北农林科技大学;2018年

7 冯敞;PPARγ-mTORC2通路介导黄绿青霉素所致细胞自噬的作用研究[D];大连医科大学;2018年

8 候晓敏;PPARγ-CD36信号通路对矽肺肺泡巨噬细胞脂质代谢调控的作用研究[D];华北理工大学;2018年

9 雷航;丹皮酚调控PPARγ对内毒素休克大鼠急性肺损伤的保护作用[D];广州中医药大学;2016年

10 田倩;PGC-1α-PPARγ通路介导PM2.5联合低氧致BEAS-2B细胞损伤的机制及玉屏风颗粒的保护作用[D];河北医科大学;2018年

本文编号：2720606