Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞肝样分化的作用及机制研究

发布时间：2020-06-21 23:35

【摘要】：第一章 Galectin-3在诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化中的作用目的通过单独应用Galectin-3、肝细胞生长因子(HGF)以及联合Galectin-3、HGF对BMSCs进行诱导培养,以研究Galectin-3对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肝样细胞诱导分化的作用。方法对大鼠股骨骨髓间充质干细胞进行提取,分离,传代培养及鉴定。取第4代细胞进行诱导培养,分组:A组:SD大鼠BMSCs;B组:SD大鼠BMSCs+0.5μg/ml Gal-3;CC组:SD大鼠BMSCs+20ng/mlHGF;D组:SD大鼠BMSCs+0.5μg/ml Gal-3+20ng/ml HGF;E组:大鼠肝细胞。分别在诱导后7、14、21、28d进行细胞形态学观察、糖原染色观察,并行实时定量PCR以及Western blot检测,鉴定其分化情况。结果大鼠股骨骨髓分离出的细胞符合骨髓间充质干细胞特性。诱导后,B、C、D组BMSCs形态逐渐向肝样细胞转化,D组28d时细胞形态与肝细胞相对比相似度最高。糖原染色28d时A组无染色,B、C、D组染色较前增多,D组染色率最高(P0.05)。Q-PCR检测AFP、ALB、CK-18表达逐渐升高,28d时B组与C组各指标较接近(P0.05)。Gal-3与HGF对AFP、ALB的mRNA表达不存在交互效应(AFP:F=0.236,P=0.640;ALB:F=50.639,P=0.000),对CK-18的mRNA表达有协同效应(F=50.639,P=0.000)。Western blot检测A组几乎不表达AFP、ALB及CK18,B、C、D组AFP、ALB及CK18蛋白表达随时间延长,逐渐增加。结论Galectin-3能够单独诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化,而且联合HGF诱导BMSCs分化的效率更高。第二章 Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的机制研究目的探讨Galectin-3联合BMSCs对治疗大鼠急性肝衰竭的效果,并研究Galectin-3诱导BMSCs为肝样细胞的分子机制。方法首先构建大鼠急性肝衰竭模型,并比较不同处理组大鼠的肝功能恢复情况以及观察肝细胞的特性。然后通过基因芯片筛选出Galectin-3诱导BMSCs分化为肝样细胞过程中差异性表达基因,从而找出所涉及的相关通路。最后通过细胞免疫组织化学法和Western Blot检测YAP、P-YAP及肝细胞特异蛋白ALB、AFP、CK18的表达。结果Galectin-3联合BMSCs能有效改善肝衰竭大鼠的肝功能。基因芯片发现了 Galectin-3诱导BMSCs分化为肝样细胞过程中上调基因为27个,下调基因为 62 个。涉及 TGF-β、PI3K-Akt及 Hippo 等信号通路。Gal-3 及 Gal-3+XMU-MP-1诱导组的YAP表达较空白对照组增加,Gal-3+XMU-MP-1较单独应用Gal-3诱导BMSCs分化的效率高。结论Galectin-3联合BMSCs能有效治疗大鼠急性肝衰竭,诱导过程与TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信号通路相关。抑制Hippo信号通路可提高诱导效率。本项目从细胞-动物两个层次,揭示了 Galectin-3诱导BMSCs为肝样细胞的分子机制,为临床上应用Galectin-3联合BMSCs治疗肝衰竭提供科学依据。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R575
【图文】：

出现聚集生长；培养至２８ｄ时，各组细胞数量继续增加，形态与肝细胞相逡逑似，呈铺路石样改变，形成岛状连接成片。其中以Ｄ组２８ｄ时细胞形态与肝细逡逑胞相对比相似度最高（图１．２Ａ）。取各组各时间点细胞进行糖原染色鉴定，结果逡逑可见肝细胞明显染色，Ｂ、Ｃ、Ｄ组随时间推移染色率（ＩＯＤ／Ａｒｅａ）逐渐增多。逡逑２８ｄ时Ａ组无明显染色，Ｄ组染色率最高，且与Ｂ、Ｃ组有明显差异逡逑（Ｐ＜０．０５），Ｂ、Ｃ邋组间无明显差异（Ｐ＞０．０５）（图邋１．２Ｂ、Ｃ）。逡逑１９逡逑

取各组大鼠的外周血，各组大鼠在注射入试剂前各项肝功能指标无明显差逡逑异。在注射入试剂之后，各组肝功指标均逐渐好转。Ｂ－Ｆ组与Ａ对比，第２天逡逑开始ＡＬＴ、ＴＢＩＬ及ＡＬＢ均有好转（图２．２Ａ）。另外，Ｃ、Ｄ组相对比发现，逡逑注射试剂后第２天Ｄ组ＡＬＴ水平显著低于Ｃ组，且Ｄ组第３天的ＡＬＢ水平显逡逑著高于Ｃ组（Ｐ＜０．０５）（图２．２Ｂ）。Ｅ组与Ｆ组对比发现，注射试剂后第３天时逡逑Ｆ组ＡＬＴ及ＴＢｉｌ水平显著低于Ｅ组，且Ｆ组第５天的ＡＬＢ水平显著高于Ｅ组逡逑（Ｐ＜０．０５）（图邋２．２Ｃ）。逡逑３６逡逑

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王永悦;;乳腺癌组织中Galectin-3与EGFR蛋白的表达及意义[J];广东医学;2015年24期

2 崔娜;李淼;龙彦;程建华;李淑慧;;卵巢上皮性肿瘤中Galectin-3、VEGF的表达及意义[J];中国处方药;2015年02期

3 成小凤;何云;李小庆;成力;张浩;;奥美沙坦对慢性心力衰竭患者血清Galectin-3水平的影响[J];现代生物医学进展;2014年13期

4 刘雪飞;;Galectin-3在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义[J];中国医药指南;2013年23期

5 马丽华;刘萱;刘华;卢满存;;喉鳞癌中Galectin-3蛋白的表达及意义[J];中国实验诊断学;2011年09期

6 陈启光;杨琦;张哲;于秀月;单广夷;孔垂泽;;Galectin-3在膀胱癌中的表达及临床意义[J];中国医科大学学报;2010年09期

7 张伟;王铁栓;赵松;陈奎生;;PTEN、Galectin-3和Ki-67在胸腺瘤中的表达及其临床意义[J];中国老年学杂志;2009年22期

8 孔庆杨;崔俊生;倪劲松;吕文;;Galectin-3在甲状腺滤泡性肿瘤中表达的研究进展[J];临床与实验病理学杂志;2008年01期

9 廖紫琼;朱润庆;张锴;夏东;;Galectin-3与MMP-2在乳腺癌中的表达及意义[J];武汉大学学报(医学版);2007年02期

10 陈伟;张方毅;陈洪德;李叶平;黄卡特;;Galectin-3蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义[J];临床泌尿外科杂志;2007年09期

相关会议论文 前10条

1 张琪;;血液透析患者血清galectin-3与腹主动脉钙化独立相关[A];2016年中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会学术年会论文摘要汇编[C];2016年

2 余慧萍;樊祥山;孟凡青;周强;孟奎;张东生;;Galectin-3表达与乳腺癌进展、转移关系的研究[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年

3 陈伟;张方毅;陈洪德;李叶平;黄卡特;;Galectin-3蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义[A];2006年浙江省泌尿外科学术会议论文汇编[C];2006年

4 古爱军;周林玉;;Galectin-3在肾细胞癌中的表达及意义[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年

5 王一凤;廖兵;;Galectin-3、Cytokeratin-19在甲状腺良、恶性肿瘤细针穿刺标本中的表达[A];2014第六届全国甲状腺肿瘤学术大会论文集[C];2014年

6 张嘉惠;;腹透患者血清Galectin-3浓度与血管硬化[A];2016年中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会学术年会论文摘要汇编[C];2016年

7 满斯亮;孙琳;刘湘源;;Galectin-3在类风湿关节炎患者外周血的表达及意义[A];第17次全国风湿病学学术会议论文集[C];2012年

8 张炜;杜国平;周剑萍;刘银坤;;Galectin-3在人子宫内膜的时续表达[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

9 黄娟;罗运春;;Galectin-3在哮喘小鼠气道炎症的作用及低分子柑桔果胶的干预[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年

10 程变巧;姜泊;;Galectin-3在大肠癌中表达及其增殖调控研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

相关博士学位论文 前10条

1 杨志明;半乳糖凝集素Galectin-3与胃癌腹膜播散转移关系的基础与临床研究[D];四川大学;2005年

2 蒋海飚;Galectin-3在胰腺癌增殖、浸润和血管生成中的作用[D];上海交通大学;2007年

3 陈欣;甲状腺滤泡状癌临床研究及Galectin-3早期诊断意义[D];浙江大学;2013年

4 安U

本文编号：2724823