应用SELDI筛选肝纤维化血清标志物的初步研究

发布时间：2020-06-28 17:20

【摘要】：我国作为乙型病毒性肝炎的高发区历来为世界所关注,尤其肝炎所导致的肝纤维化、肝硬化甚至肝癌更是成为科研临床工作者的共识。尽管已经采取了一系列措施来减缓这一进程,但是效果不甚理想。如何及时地预测和诊断炎症向纤维化的进展一直是个难题,传统的诊断方法包括临床症状与体征、影像学和组织病理检查,但因为特异度、灵敏度不高或病人依存性差等原因在临床的应用上受到一些限制。本课题的目的在于尝试使用蛋白组学的方法(表面增强激光解吸／离子化时间飞行质谱技术)对正常人及纤维化各个病理分期的血清样本进行对比,筛选出能反映肝纤维化程度的差异蛋白,并构建相对应的诊断模型,为临床建立早期诊断肝纤维化的实验方法提供新的线索。第一部分乙肝肝纤维化和健康组之间差异蛋白的筛选目的：筛选诊断肝纤维化外周血清特异性的差异蛋白峰。方法：采用表面增强激光解吸／离子化时间飞行质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测20例健康者和61例肝纤维化患者的血清蛋白质表达谱,肝纤维化病理诊断依据2000年西安会议标准,其中S1期31例,S2/3期25例,S4期5例。直接应用研究对象的外周血清通过SELDI-TOF-MS技术检测蛋白质谱,然后对检测出的蛋白质谱应用biomarker Wizard软件比较分析,筛选出可能反映肝纤维化的差异表达蛋白质谱峰。结果：在健康组与肝纤维化S1期患者外周血蛋白质谱比较后发现19个差异蛋白峰,其中6个上调,13个下调；健康组与肝纤维化S2/3期患者外周血蛋白质谱比较后发现15个差异蛋白峰,8个为上调,7个下调；健康组与肝纤维化S4期患者外周血蛋白质谱比较后发现14个差异蛋白峰,9个上调,5个下调；肝纤维化S1期与S2/3期比较后发现11个差异蛋白峰,5个上调,6个下调；肝纤维化S1期与S4期比较后发现9个差异蛋白峰,其中7个上调,2个下调；肝纤维化S2/3期与S4期比较后发现3个差异蛋白峰,均为上调。质荷比为M8471的蛋白质在整个纤维化期持续下调,质荷比为M5304的蛋白质在整个纤维化期持续上调。结论：质荷比为M8471和M5304的蛋白质可能是潜在的肝纤维化外周血清标志物。第二部分肝纤维化SELDI诊断模型的建立目的：建立肝纤维化各个分期最佳的SELDI诊断模型。方法：用Biomarker Pattern软件对已发现的差异蛋白峰做线性分类分析,经过进一步优化实验参数确定最佳的肝纤维化SELDI诊断模型。结果：用质荷比峰M4799联合M6125建立的区分健康组与肝纤维化S1期的诊断模型准确率为87%,特异度为80%,灵敏度为87%；用质荷比峰M6215建立的区分健康组与肝纤维化S2/3期的诊断模型准确率为84%,特异度为65%,灵敏度为84%；用质荷比峰M8591建立的区分健康组与肝纤维化S4期的诊断模型准确率为92%,特异度为90%,灵敏度为100%；用质荷比峰M6123建立的区分肝纤维化S1期与S2/3期的诊断模型准确率为75%,特异度为67%,灵敏度为76%；用质荷比峰M4603建立的区分肝纤维化S1与S4期的诊断模型准确率为92%,特异度为84%,灵敏度为100%：用质荷比峰M4799建立的区分肝纤维化S2/3与S4期的诊断模型准确率为100%,特异度为100%,灵敏度为80%。结论：SELDI-TOF-MS结合决策树技术筛选到的蛋白标志物,有望成为肝纤维化早期诊断、疾病预测和预后分析的靶标,课题组下一步将进行纯化、鉴定、功能研究和临床验证等工作。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575.2
【图文】：

健康人,质谱图,质荷比,过滤噪音

并快速精确地绘制出蛋白质质谱图，其中纵坐标为蛋白质相对含量，横坐标为蛋白质质荷比，红色标记为ciphergenproteinehip软件在2，O00Da一20，000Da范围内自动采集的蛋白峰值(见图1一4)。将所有样本2000M/Z以上的质荷比峰，用BiomarkwiZard软件过滤噪音，设置系数:初次噪音过滤值为5，第二次为2，最小闻值10%。

肝纤维化,质谱图,患者,质荷比

【参考文献】