乙型肝炎病毒胎盘感染与宫内传播

发布时间：2020-06-29 06:25

【摘要】：目的： 1.探讨孕妇HBV感染对胎儿及胎盘生长发育的影响。 2.利用组织学实验方法探讨HBV感染对胎盘形态和功能的影响。 3.利用体外实验研究HBV在胎盘滋养细胞的感染状况，初步探讨HBV感染胎盘滋养细胞后能否在滋养细胞内复制。 方法： 1.第一部分：回顾性分析194例HBsAg阳性的孕妇及其新生儿的临床资料，并随机选取296例HBsAg阴性的孕妇及其新生儿作为对照组，分析这两组的妊娠并发症，围产儿结局及胎儿-胎盘发育指标和HBV宫内感染的关系。 2.第二部分：收集血清HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织25例作为病例组，血清HBsAg阴性孕妇足月胎盘组织10例作为正常对照组，免疫组化PV-6002二步法检测病例组胎盘组织HBsAg的表达；荧光定量PCR检测胎盘组织HBVcccDNA的表达；免疫组化抗CD34标记绒毛血管，体视学方法定量分析绒毛微血管长度密度和体积密度的改变； TUNEL法检测胎盘细胞的凋亡指数。 3.第三部分：收集HBV携带孕妇足月胎盘12例，采用密度梯度离心法联合反复贴壁法分离、纯化滋养细胞，提取滋养细胞进行培养；流式细胞术检测滋养细胞CK-7的表达，进行细胞纯度鉴定，免疫双标法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测滋养细胞CK-7及间质Vimentin的表达，进行细胞形态学鉴定；PCR-荧光探针法检测体外培养24、48、72h滋养细胞上清HBV DNA的表达；微粒子酶免疫分析技术检测体外培养24、48、72h滋养细胞上清HBsAg和HBeAg的表达；流式细胞分选技术分选出纯度98%以上的滋养细胞，荧光定量PCR检测滋养细胞中HBVcccDNA的表达。 结果： 1.第一部分： 1)临床资料分析显示，HBsAg阳性孕妇孕产次较HBsAg阴性孕妇高(P0.05)；HBsAg阳性孕妇新生儿出生体重和胎盘体积较HBsAg阴性孕妇小(P0.05)；孕妇HBV-DNA阳性组的胎盘体积较HBV-DNA阴性组小； ALT异常组的胎盘体积大于ALT正常组(P0.05)； 2)新生儿HBsAg阳性组的出生体重、身长，胎盘体积均较阴性组低，FGR发生率较阴性组高(P0.05)；新生儿HBeAg阳性组FGR发生率较阴性组高，胎盘体积较阴性组小(P0.05)；新生儿HBsAb阳性组胎盘体积较阴性组大(P0.05)； 3)胎盘体积为HBV宫内感染的保护因素(OR=0.996，p=0.005)，母血HBV DNA为宫内感染的危险因素(OR=1.396，p=0.004)。 2.第二部分： 1)免疫组化结果显示，25例HBV感染胎盘中有13例胎盘HBsAg阳性，阳性率为52.0%，阳性信号主要分布于滋养细胞(TC)，绒毛间质细胞(VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞(VCMC)； 2)20例胎盘中，有7例胎盘组织HBV cccDNA阳性，阳性率为35.0%，表达量(copies/ml)分别为：6.04×10~5、3.82×10~3、8.94×10~3、2.91×10~4、7.02×10~3、5.28×10~2、1.12×10~4；胎盘HBV cccDNA (+)组的肝功能异常率高于胎盘HBVcccDNA(-)组，孕次较胎盘HBVcccDNA(-)组多(P0.05)；母血HBV DNA滴度与胎盘HBV cccDNA滴度呈明显的正相关(r=0.994，P=0.000)；孕次和胎盘HBsAg阳性是胎盘HBV cccDNA阳性的危险因素，OR值分别为4.85和16.02； 3)胎盘绒毛微血管体视学结果显示，CD34几乎标记所有血管，绒毛血管内皮细胞在乙肝胎盘和正常胎盘均为阳性表达；乙肝组的微血管Lv较正常组小，微血管Vv较正常组大，但两者比较均无统计学差异(P0.05)；微血管Vv与胎盘HBV cccDNA滴度呈明显正相关(r=0.944，P=0.001)； 4)凋亡结果显示，HBV感染胎盘及正常胎盘组织均可检出凋亡细胞，凋亡细胞在胎盘不同类型的细胞均有表达；HBV感染胎盘滋养细胞和绒毛间质细胞的凋亡指数比正常胎盘的凋亡指数高，且两组间的比较具有明显统计学差异(P0.05)；母血HBV DNA滴度和AI呈中度正相关(r=0.422，p=0.045)；微血管Lv与AI呈中度负相关(r=-0.464，p=0.022)。 3.第三部分： 1)12例HBV携带孕妇胎盘滋养细胞体外培养24、48、72h，上清均可检测到HBV DNA和HBsAg、HBeAg的阳性表达，HBV M滴度在24h表达量最高，随着时间的推移，HBV DNA滴度逐渐下降，而HBsAg和HBeAg滴度呈先下降后上升的趋势，但3个时间点均无统计学差异(P0.05)；3个时间点上清HBsAg和HBeAg的表达量有良好的相关性(P0.05)； 2)12例HBV胎盘滋养细胞标本，有4例检测出HBV cccDNA阳性，阳性率33.3%，表达量(copies/ml)分别为：5.67×10~3、2.12×10~4、1.72×10~4、4.90×10~4；母血HBV DNA滴度和滋养细胞HBV cccDNA滴度呈良好的正相关(r=0.997，p=0.023)。 结论： 1. HBV感染可影响胎儿-胎盘的生长发育，导致胎盘体积缩小，出生体重降低。 2.胎盘体积是HBV宫内感染的保护因素，新生儿HBsAb阳性者的胎盘体积大于新生儿HBsAb阴性者；母血高病毒载量及转氨酶升高是HBV宫内感染的高危因素。 3.孕次和胎盘HBsAg阳性是胎盘HBV cccDNA阳性的危险因素。随着母血HBV DNA滴度的升高，胎盘HBV cccDNA滴度增加，微血管体积密度增大。 4.胎盘HBV感染者，胎盘滋养细胞和绒毛间质细胞的凋亡指数增高。 5. HBV可以感染胎盘滋养细胞并在滋养细胞内繁殖复制。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R512.62
【图文】：

.图 2-1 方网测试系统（测试框）如图，每小方格边长为 d，每小方格面积 d2为每一测试点的测面积禁线法则［11］：又称为无偏计数法。测试框的右边和上边（虚线）称为计

图 2-2 点计数技术如图，阴影部分为绒毛微血管，透亮部分为绒毛。图中，Qx=4，Lv=2M2*Qx/aPc，Vv=100*Px/Pc=17.39%视学参数和计算公式：

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本文编号：2733534