ABRO1敲除抵抗MCD诱导的非酒精性脂肪性肝炎及其机制研究

发布时间：2020-06-30 10:32

【摘要】：非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已超越慢性病毒性肝炎成为我国的第一大肝脏疾病,严重危害人类健康。从起初的简单脂肪性病变,发展为脂肪性肝炎,随着病情程度加深,逐渐出现肝脏的纤维化,最终导致肝硬化,以及肝癌的发生。非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)患者有高达20%几率演变为肝硬化。目前,临床尚缺乏针对性的有效治疗措施。揭示NASH的发病机制,发现治疗的靶点,将大大促进该病的防治。蛋氨酸-胆碱缺乏饮食(methionine and choline deficient diet,MCD)模型,是研究NASH的经典动物模型。饲料中缺乏蛋氨酸和胆碱可导致肝内转运甘油三酯的极低密度脂蛋白合成受阻,同时抗氧化物质谷胱甘肽的合成也受到阻碍,从而诱使肝内大量甘油三酯沉积导致脂肪变性,并激发脂质过氧化和氧化应激ROS水平的升高,伴随机体抗氧化屏障受损。双重打击最终导致肝脏炎症的发生和细胞凋亡,引发严重的NASH。ABRO1是去泛素化酶BRISC复合体的重要成员之一。它作为支架蛋白负责募集BRCC36,MERIT40和BRE,是BRISC复合体去K63位泛素化活性必须的成分。前期研究报道,ABRO1参与了多种生物学过程的调控如DNA损伤修复、缺血再灌注损伤、细胞周期调控等,并在I型干扰素受体引发的免疫应答等方面发挥了重要作用。本论文利用ABRO1敲除小鼠观察了ABRO1在MCD诱导NASH发生发展的作用。Western-blot和Real-time PCR检测发现,在MCD模型中肝脏ABRO1表达上调;HE染色、油红染色和肝内甘油三酯检测发现,敲除ABRO1小鼠肝脏中MCD诱导的脂积累显著低于正常小鼠。检测血清转氨酶水平、肝内炎性细胞浸润、肝内相关炎性因子的表达和分泌发现,ABRO1缺失显著降低MCD诱导的肝脏炎症反应。此外,马松染色和caspase-3免疫组化检测发现,敲除ABRO1小鼠MCD诱导的肝内纤维化和细胞凋亡显著降低。这些结果表明ABRO1敲除显著抑制了MCD诱导的NASH发生发展。为揭示ABRO1的作用机制,我们采用骨髓移植建立了骨髓嵌合体小鼠,结果发现,接受了正常小鼠骨髓细胞移植的ABRO1敲除受体小鼠失去了其原本抵抗MCD诱导NASH的能力,提示ABRO1敲除主要通过影响骨髓来源细胞抵抗MCD诱导的NASH。进一步,我们利用BRCC3(BRISC复合体的酶活性亚基)敲除小鼠观察了ABRO1的作用是否依赖BRISC复合体,结果发现与ABRO1敲除不一样,敲除BRCC3后对MCD诱导的脂肪变性没有显著影响,仅对后期的炎症反应存在一定影响,说明ABRO1敲除抵抗MCD诱导的NASH可能不依赖BRISC活性,而是与ABRO1不依赖BRISC复合体的功能相关。这些研究为认识ABRO1促进NASH发生发展分子机制的认识提供了重要的功能线索。综上所述,本论文发现ABRO1敲除小鼠显著抵抗MCD诱导的NASH的发生发展,机制研究揭示ABRO1主要通过不依赖BRISC复合体的方式,影响了骨髓来源细胞(最可能是肝内免疫细胞)的功能而发挥作用。我们的研究揭示了NASH新的发病机制,为NASH的防治提供了新的思路。进一步的研究将聚焦在ABRO1在人类NASH中的作用和其分子机制。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575.1
【图文】：

过程图,过程,肝硬化,肝脏脂肪变性

1.1 非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的“过去”与“现在”非酒精性脂肪性肝炎（non -alcohol fatty steatohepatitis，NASH）是一种严重的非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD），被广泛认为是世界范围内慢性肝病的重要原因。随着时间的推移，由于各种风险因素逐渐出现，比如体重增加、糖尿病、高血压、绝经、以及相关遗传因素等，都会进一步促进 NASH的发展，最终导致肝纤维化、肝硬化和肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的发生发展[1]。正如我们所知道的，简单的肝脏脂肪变性和后期发展的 NASH 有很大不同，最主要的是后者具有不同程度的肝脏纤维化和严重的肝内炎症反应。虽然大多数简单的脂肪变性发展为更加严重疾病的几率很小，但是 NASH 却有较高的几率进一步发展为肝硬化和终末期肝病（Fig 1）。

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图 2 NASH“二次打击”学说分子机制[18]Fig2 The hypothesis of Two-hits in NASH[18]1.4 NASH 的热点治疗策略NASH 一直处于缺乏有效的药物治疗和临床治疗的现状，是研究这种疾病新治疗方法的主要动机。随着科研工作者们几十年来的关注与探索，目前对于 NASH的新兴分子机制和治疗策略的研究热点主要包括（Fig 3）：核转录因子的调控;脂毒性和氧化应激的靶向药物研究;调节细胞能量稳态、代谢以及炎症应答。

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