间充质干细胞对大鼠腹膜间皮细胞转分化的抑制作用

发布时间：2020-07-08 19:05

【摘要】：背景：腹膜纤维化是导致腹膜超滤衰竭的最主要原因，慢性腹膜纤维化导致的腹膜超滤衰竭是终末期肾病（end stage renal disease，ESRD）患者退出腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）的主要原因。腹膜间皮细胞（peritoneal mesothelialcells，PMCs）在物质转运、维持腹膜稳态、局限炎症、组织损伤修复等方面都发挥着重要作用。腹膜在慢性损伤作用下部分PMCs从上皮细胞表型向间充质细胞表型发生转分化（epithelial-myofibroblast transdifferentiation，EMT）亦能启动纤维化进程，导致腹膜丧失超滤功能。骨髓间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSCs）可以通过定植、分化和/或旁分泌生物活性因子抑制炎症和纤维化。 目的：探讨骨髓间充质干细胞对高糖腹透液诱导的原代大鼠腹膜间皮细胞转分化的抑制作用。 方法：提取大鼠原代腹膜间皮细胞，制作原代腹膜间皮细胞在高糖腹透液刺激下的EMT模型。光镜、免疫荧光，western观察腹膜间皮细胞形态学变化及E-Cadherin,α-SMA，Snail1表达变化。通过PMCs与MSCs共培养，免疫荧光，western检测E-Cadherin,α-SMA,Snail1改善情况。 结果：在高糖腹透液刺激下，E-Cadherin表达逐渐下调，α-SMA，Snail1表达逐渐上调。骨髓间充质干细胞对E-Cadherin下调和α-SMA，Snail1上调具有抑制作用。 结论：骨髓间充质干细胞对高糖腹透液诱导的原代大鼠腹膜间皮细胞转分化有抑制作用。
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R572.2
【图文】：

图 4-1.原代 RPMSCs 培养的鉴定（A. 光镜，×100；B. 免疫荧光，×600；绿色分别为E-Cadherin、Cytokeratin、α-SMA，蓝色为 DAPI）Fig 4.1. Identification of the characteristics of primary RPMCs (A. Light microscopy,×100; B.Immunofluorescence staining, ×600; green represents E-Cadherin, Cytokeratin,α-SMA,respectively; blue represents DAPI)

图 4-2. RPMSCs 光镜下形态学变化（100 倍）Fig 4.2morphological changes of RPMSCs. (Light microscopy, ×100;)PMCs 形态学变化（光镜 100 倍）含 1.5%PDF 的无血清培养基刺激大鼠腹膜间皮细胞，随刺激时间延长，细胞逐渐丧失铺路石样表型。 大鼠壁层腹膜提取的原代大鼠腹膜间皮细胞，用含 1.5%葡萄糖腹透液（与无血清培养基 1:1）的DMEM/F12 培养基培养，随着培养时间的延长，间皮细胞在光镜下的形态发生了明显变化。从正常情况下典型的铺路石样形态变成铺路石样和类似成纤维细胞样混合存在。形态学变化和细胞死亡情况和刺激时间及腹透液葡萄糖浓度密切相关。细胞 12h 死亡增加，24h 部分变长、分叉，48h 形态变化明显，72h 后开始明显死亡，其余细胞呈树枝样。 2.5%和 4.25%葡萄糖腹透液培养细胞，在短时间内细胞形态发生明显变化并大量死亡（图片结果未显示）。

图 4-3 原代 RPMSCs 在腹透液刺激下 E-Cadherin 表达变化（ 免疫荧光×600；绿色分别为 E-Cadherin，蓝色为 DAPI）Fig 4.3 E-Cadherin changes of RPMSCs induced by PDF(Immunofluorescence staining,×600; green represents E-Cadherin, blue represents DAPI)图 4-4 原代 RPMSCs 在腹透液刺激下 E-Cadherin 表达变化（western blotting）Fig 4.4 E-Cadherin changes of RPMSCs induced by PDF（western blotting）

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 朱兴阳;黄永明;徐伟龙;苏海涛;刘军;;间充质干细胞治疗骨性关节炎的研究进展[J];广东医学;2013年18期

2 Saber Sakr;Laila Rashed;Waheba Zarouk;Rania El-Shamy;;Effect of mesenchymal stem cells on anti-Thy1,1 induced kidney injury in albino rats[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2013年03期

3 袁君杰;谢幼专;卢霄;卢建熙;;不同微环境对人骨髓间充质干细胞体外增殖和分化的影响[J];国际骨科学杂志;2013年06期

4 魏开勇;黄维义;;血红素氧化酶-1在器官及细胞移植中的作用[J];广东医学;2013年19期

5 黄云剑;梁莉;王梓华;赵景宏;;肝细胞生长因子对维持性腹膜透析患者腹膜微炎症状态及超滤量的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2009年05期

6 王立瑞;黄海东;蒋更如;刘怡晟;;虫草菌液对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子β_1和纤维连接蛋白表达的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年06期

7 庄薇;陈红;施敏;钟爱民;;血管生成素及其受体在腹膜透析腹膜组织中的表达[J];临床与实验病理学杂志;2011年08期

8 张卓远;李龙江;;微泡的研究进展[J];临床口腔医学杂志;2013年08期

9 Juan Xu;Bo Yu;Christine Hong;Cun-Yu Wang;;KDM6B epigenetically regulates odontogenic differentiation of dental mesenchymal stem cells[J];International Journal of Oral Science;2013年04期

10 谭笑;汪年松;;干细胞治疗糖尿病肾病的研究进展[J];中国中西医结合肾病杂志;2013年08期

相关博士学位论文 前10条

1 蒋佳;双基因修饰组织工程骨的构建及其成骨的研究[D];上海交通大学;2008年

2 王楠;骨髓间充质干细胞减轻腹膜纤维化研究[D];南开大学;2012年

3 申晶;骨髓源间充质干细胞输注促进STZ诱导的糖尿病大鼠胰腺内α细胞向β细胞的转变：糖尿病治疗的新模式[D];中国人民解放军军医进修学院;2013年

4 朱天琦;GDNF和NT-3双基因诱导BMSCs分化为神经样细胞的实验研究[D];华中科技大学;2013年

5 齐义营;干细胞片/富含血小板血浆/磷酸钙颗粒用于骨修复的研究[D];浙江大学;2013年

6 苟丽娟;人骨髓间充质干细胞诱导分化为软骨细胞过程中microRNA作用机制研究[D];北京协和医学院;2013年

7 杨舟鑫;CD106是具有强免疫调节功能的胎盘绒毛膜间充质干细胞的标志[D];北京协和医学院;2013年

8 王有为;脐带间充质干细胞临床前安全性研究[D];北京协和医学院;2013年

9 王喜梅;Sitagliptin对缺氧环境下骨髓间充质干细胞的保护作用及相关机制研究[D];北京协和医学院;2013年

10 解芳;构建同种异体组织工程骨及修复犬颅骨临界骨缺损的实验研究[D];北京协和医学院;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 孙良;兔外周血间充质干细胞的分离培养及脱细胞软骨基质制备的实验研究[D];山东大学;2011年

2 庄薇;血管生成素及其受体在腹膜透析腹膜组织中的表达[D];南昌大学;2011年

3 赵志红;塞来昔布对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜功能和血管新生的影响[D];郑州大学;2012年

4 修亦斌;肝细胞生长因子对高糖诱导的腹膜纤维化的影响[D];福建医科大学;2009年

5 高平;骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导分化为类神经细胞移植治疗大鼠脊髓损伤[D];山东大学;2013年

6 暴志国;ADSCs在组织工程化软组织当中的应用与研究[D];郑州大学;2013年

7 余列;骨髓单个核细胞移植对脑梗死大鼠新血管形成的影响[D];郑州大学;2013年

8 杨继涛;低能激光照射对大鼠梗死心肌组织中氧自由基和心室重塑的影响[D];郑州大学;2013年

9 郝晓娟;缺氧高糖预处理hUC-MSCs诱导分化为内皮样细胞的实验研究[D];河北医科大学;2013年

10 魏建强;不同途径移植骨髓间充质干细胞促进创伤性脑损伤大鼠功能恢复和神经再生的研究[D];河北医科大学;2013年

本文编号：2746924