当前位置:主页 > 医学论文 > 消化疾病论文 >

HBV在人脐血单个核细胞内的培养研究

发布时间:2020-07-11 21:29
【摘要】:目的:建立人脐血单个核细胞的体外培养系统,用HBV感染人脐血单个核细胞,了解HBV在人脐血单个核细胞内的复制、分泌过程,进而建立起人脐血单个核细胞作为HBV感染的细胞模型,为探讨和研究HBV宫内感染的分子机制及HBV垂直感染奠定基础。 方法:在大理学院附属医院妇产科收集脐血,用EDTA做抗凝剂,采用Ficoll密度梯度离心法分离得到人脐血单个核细胞,苔盼蓝染色结果表明活细胞比率达到98%。将脐血单个核细胞用RPMI1640培养液按照1×106/ml的密度接种在24孔细胞培养板中,在37℃、5%的CO2培养箱内培养,倒置显微镜观察细胞形态学的动态变化。用病毒颗粒与脐血单个核细胞比约为100:1进行感染。在HBV感染人脐血单个核细胞后继续培养15d,每天采用酶联免疫法(ELSIA)对细胞培养上清液检测乙肝病毒五项指标(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb),运用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术对细胞培养上清液和细胞内的HBV DNA进行定量检测,确定HBV DNA感染的动态变化。结果:⑴脐血单个核细胞形态学的动态变化:脐血单个核细胞在培养15d内能维持正常的细胞形态与结构,绝大部分细胞悬浮生长,少量细胞贴壁生长。 ⑵ELSIA法检测培养细胞上清液中乙肝五项指标:培养细胞上清液在第1d,HBsAg表现为阳性,第2d转为阴性,随后细胞培养至第7~10d时,HBsAg再次出现阳性,之后又转为阴性,HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb在检测中,均出现阴性结果。 ⑶荧光定量PCR法检测HBV DNA:每天更换细胞培养液的细胞培养上清液中的HBV DNA第1d可以检出,第2~3d没有检测出,从第4天再次检测出,且HBV DNA的拷贝数逐渐升高,在第9d开始呈下降趋势,第13d已检测不出来,HBV DNA拷贝数的变化曲线接近呈倒“V”形;不更换细胞培养液的细胞培养上清液中的HBV DNA含量逐渐升高HBV DNA拷贝数的变化曲线呈“S”形;培养细胞中的HBV DNA在第1至第3d,细胞内并没有检测出HBV DNA,从第4d开始,可以检测得到HBV DNA,在第9d,细胞内HBV DNA的含量达到最大,随着细胞培养天数的增加,细胞内HBVDNA的含量逐渐降低。培养细胞中的HBV DNA的拷贝数变化曲线呈倒“V”形。 结论:⑴建立了人脐血单个核细胞的体外培养系统; ⑵人脐血单个核细胞可作为HBV感染的细胞模型; ⑶FQ-PCR法比ELSIA法能更好的确认标本中HBV存在。
【学位授予单位】:大理学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R512.62

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 宋闽宁,骆梅兰,黄文琪;乙肝病毒携带者外周血单个核细胞培养上清液HBV-DNA定量检测意义[J];中国医师杂志;2003年04期

2 谭龙益,王皓,孔宪涛;表达HBV的SMMC-7721人肝癌细胞系模型的建立[J];第二军医大学学报;1998年02期

3 王方,王宇明,汤勃,刘俊,刘国栋,王小红;HBV体外感染人胎肝细胞的鉴定方法研究[J];第三军医大学学报;2004年01期

4 刁志宏;张明霞;朱幼芙;何海棠;王战会;陈金军;侯金林;;重组乙型肝炎病毒P22~e基因在HepG2细胞中的表达[J];第四军医大学学报;2006年11期

5 陈剑荣,徐如祥,姜晓丹,徐强,蔡颖谦,邹雨汐,丁涟沭;兔骨髓基质细胞诱导分化成神经元样细胞的研究[J];第一军医大学学报;2004年04期

6 迟占有,蔡海波,夏泉鸣,谭文松,戴干策;脐血单个核细胞的搅拌悬浮培养[J];华东理工大学学报;2004年03期

7 任伟宏;赵素玲;赵志娟;张学东;;血清HBsAg与HBVDNA定量关系分析[J];医药论坛杂志;2010年11期

8 刘先进;吴月平;凌勇武;罗文明;王世蓬;;乙型肝炎病毒相关性肝病患者外周血白细胞中HBVcccDNA检测[J];交通医学;2007年05期

9 赵微;秦俭;董嘉楠;;成人脂肪源间充质干细胞培养上清对人脐血间充质干细胞体外培养及扩增的支持作用[J];牡丹江医学院学报;2010年04期

10 邢益平,黄祖瑚,唐保元,李锡官,孙志坚,奚安义;筛选抗HBV药物的外周血单个核细胞体外培养系统的建立[J];南京医科大学学报;2000年05期



本文编号:2750952

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/2750952.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户9886e***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com