克罗恩病与IL-32的表达及基因多态性的相关性分析

发布时间：2020-07-14 00:17

【摘要】： 目的: 观察促炎性细胞因子IL-32在克罗恩病(Crohn’s disease)患者肠黏膜中的表达情况,研究CARD15、IRGM、ATG16L1、NKX2-3基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNP)位点与中国人克罗恩病易感性的关系,为深入研究克罗恩病的发病机制奠定基础,亦为该病的防治提供实验依据。方法: ⑴收集临床确诊的克罗恩病患者(47例)及其健康对照(16名)的组织标本,经病理检验,通过免疫组化以及western blot方法观察IL-32在克罗恩病患者肠黏膜内的表达情况,检验IL-32在克罗恩病患者肠黏膜中的表达与意义。⑵提取克罗恩病患者(32例)和健康对照个体(30名)的外周血,抽提白细胞基因组DNA,检测CARD15_rs2066842、IRGM_rs13361189、ATG16L1_rs2241880以及NKX2-3_ rs10883365的SNP多态性与克罗恩病的关系,根据靶序列片段设计相应的引物,PCR扩增目的片段,经纯化后测序,测序结果分组做统计分析。结果: ⑴与对照相比,经免疫组化法和western blot法检测的IL-32在克罗恩病患者肠黏膜中表达上调,二者的表达量有显著性差异(P㩳0.05)。⑵克罗恩病病例组和健康对照组基因频率和基因型频率的组间比较显示: CARD15_rs2066842、IRGM_rs13361189、ATG16L1_rs2241880以及NKX2-3_rs10883365的SNP分布频率的差异均无统计学意义(P㧐0.05)。提示这四个基因多态性位点可能与中国人克罗恩病的易感性无关。结论: ⑴IL-32无论在克罗恩病患者还是在健康对照个体的肠黏膜内均有表达,但在克罗恩病患者肠黏膜内IL-32表达上调,研究显示IL-32表达上调能加重克罗恩病的炎症反应。⑵国外研究报道的与高加索人克罗恩病相关的CARD15_rs2066842,IRGM_ rs13361189、ATG16L1_rs2241880以及与日本人克罗恩病易感性的NKX2-3_rs10883365的SNP位点可能与我国克罗恩病患者的易感性无关,这些SNP的变异至多是增加了中国人罹患克罗恩病的风险。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R574.62
【图文】：

示意图,克罗恩病,发病机制,示意图

图 1. 克罗恩病的发病机制示意图Fig.1. schematic of Pathogenesis of Crohn's disease注：图片来源于 Renzo Caprilli, Why does Crohn's disease usually occur interminal ileum? Journal of Crohn's and Colitis （2008） 2, 352 356肠腔是免疫系统的重要组成部分，广阔的表面时刻都接触大量抗原，能区分食物和共生菌中的侵入病原体和无害抗原。当克罗恩病发生时，对无害抗原耐受性丢失。防御机制受集合淋巴结、肠系膜淋巴结、隐窝小结、淋巴细胞等肠相关淋巴样组织（gut-associated lymphoid tissue，GALT）的调节[4]。集合淋巴结是由免疫细胞组成的结构，数量众多，分布于小肠特别在回肠末端，是 GALT 最复杂的一部分，与回肠克罗恩病部位一致。克罗恩病的发病高峰在 15～25 岁，一个相似的平行峰代表了集合淋巴结可以与年龄相对应[5]。此外，CARD15 缺陷通过免疫系统过度反应诱导集合淋巴结发育异常，增加了肠黏膜的通透性[6]。

克罗恩病与IL-32的表达及基因多态性的相关性分析

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电泳图,电泳图,引物,克罗恩病

结果1 CARD15_rs2066842 单核苷酸多态性与克罗恩病的相关性1.1 CARD15_rs2066842 PCR 基因扩增片段的电泳结果（见图 5A）图 5A 为 CARD15_rs2066842 PCR 产物电泳图，扩增的目的片段为 484bp

【参考文献】