溃疡性结肠炎虚实证候分型与肠道菌群结构的差异性研究

发布时间：2020-07-15 07:39

【摘要】：【目的】通过对溃疡性结肠炎(UC)患者和健康人肠道菌群的多样性、相似性以及种属构成等研究,阐明UC不同虚实证候间肠道菌群结构的差异性,进一步通过虚实证候与肠道菌群结构差异的差异性分析,为阐明UC虚实证候的物质基础和病理机制以及UC不同虚实证候患者之间肠道菌群结构的差异性提供理论基础和实验依据。【方法】以UC患者与健康志愿者为研究对象,建立中医证候诊断、纳入和排除标准,分为湿热内蕴证组、脾胃气虚证组、脾虚湿热证组和健康对照组,采集粪便标本并提取粪便菌群总DNA;经16Sr DNA V3区PCR扩增后,采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)进行肠道菌群DNA指纹图谱分析;Mi Seq测序技术开展肠道菌群16SV3+V4区高通量测序及生物信息学分析;基于16Sr DNA指纹图谱和16SV3+V4区生物信息学数据,研究分析UC不同虚实证候组患者与健康人群肠道菌群结构的差异性。【结果】肠道菌群DNA指纹图谱分析结果表明:图谱中三种证型所呈现的条带数没有明显差异。三种UC证型患者肠道菌群多样性、相似性有差异,并且三种UC证型的患者肠道菌群的组内相似性系数高于组间相似性系数。脾胃气虚证组UC患者组内相似性系数最高,脾虚湿热证组UC患者组内相似性系数最低。三种证型中,湿热内蕴证组UC患者的多样性指数最低,脾胃气虚证组UC患者的多样性指数最高。16SV3+V4区测序及生物信息学分析结果表明:UC患者拟杆菌和厚壁菌门所占比例相对其他组较大且数量基本恒定,但它们在不同虚实证候组内中所占的比例有显著差异。厚壁菌门在湿热内蕴组及脾虚湿热组中所占比例低于健康人组(P0.05),其中韦荣球菌在厚壁菌门中较为突出,在湿热内蕴组及脾虚湿热组中所占比例低于健康人组(P0.05),其在脾胃气虚组中所含比例高于湿热内蕴组(P0.05)。变形杆菌门在脾虚湿热组中所占比例高于脾胃气虚组(P0.05)。变形杆菌门中嗜血杆菌在湿热内蕴组中所占比例高于脾胃气虚组和脾虚湿热组(P0.05)。拟杆菌门中拟杆菌和普氏菌在四组中所占比例也有所不同。拟杆菌在湿热内蕴组中所占比例高于健康人组(P0.05)。普氏菌在三组虚实证型的溃疡性结肠炎受试者肠道菌群中所占比例均低于健康人组(P0.05)。放线菌门中棒状杆菌在湿热内蕴组中所占比例高于脾胃气虚组(P0.05)。真杆菌属在脾胃气虚组和脾虚湿热组中所占比例均小于健康人组(P0.05)。DGGE法和测序结果反映出的UC患者不同虚实证候组及健康人组的肠道菌群结构差异性和相似性结果基本一致。【结论】1.UC三类虚实证候患者与健康人比较,肠道菌群的相似性、多样性均存在差异。2.UC三类虚实证候患者与健康人比较,肠道菌群门水平和种属水平的细菌构成存在差异性,门水平上差异可能存在于厚壁菌门所占比例;种属水平的差异可能存在于韦荣球菌、拟杆菌和普氏菌所占比例。3.UC三类虚实证候患者之间肠道菌群差异性可能存在于厚壁菌门和变形菌门的构成比。
【学位授予单位】：陕西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574.62
【图文】：

完整性检测,产物,变性剂

PCR产物的完整性检测结果

变性剂,引物,DNA双链,双链

围的确定（见图 2）理，即当变性剂浓度逐渐增大时，DNA双 DNA双链迁移的速率不同，最终导致停留量多的解开双链所需要的浓度自然大，反原理可以区分出 DNA大小不同片段。槽中移动的方向与增大凝胶浓度的方向互型，测量横轴显著变化的变性剂范围，观扩增产物 DGGE 分析合适的变性梯度范围

分析图,肠道菌群,样本,分析图

从左向右依次观察条带可以得到：标记 2-24 号为湿热内蕴证，1-36 号为脾胃气虚证，4-43 号为脾虚湿热证。对不同组之间进行多样性分析可以得到如下结果。首先比较样本的条带数目（表 5），可以看到三组证型的粪便样本条带数无显著差别（P＞0.05）。多样性用 Shannon（H’）表示（见图 3）。

【参考文献】