胆红素对大鼠颈上交感神经节细胞乙酰胆碱受体通道电流的影响及其机制

发布时间：2020-07-15 06:50

【摘要】：目的：重度黄疸患者交感神经兴奋性降低，并且自主神经功能下降与血浆胆红素浓度相关。交感神经通过突触前释放乙酰胆碱（acetylcholine, ACh）作用于突触后烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs）通道调控节后纤维末端的递质（儿茶酚胺）释放，从而调节心血管系统功能。颈上交感神经节（superiorcervical ganglia, SCG）细胞上的nAChRs在突触信息的加工、处理和传递过程中起重要作用。因此我们研究胆红素对SCG上nAChRs通道电流的影响以阐明黄疸患者自主神经功能降低的机制。方法：将SD大鼠（5-12d）断头，快速取出SCG，放入含I型胶原酶、蛋白酶E和脱氧核糖核酸酶的氧饱和的31.5℃孵育液中消化25-40min，之后用吸管将消化好的神经元细胞打散，获取单个神经元细胞，将其放置培养皿30min，灌流液冲洗后行膜片钳实验。所有的电生理测量均在室温（22-25℃）下通过全细胞膜片钳记录模式进行，玻璃电极采用P-97微电极拉制仪四部法拉制而成。利用微操纵仪将玻璃电极放置在神经元上，当封接阻抗大于1G时吸破电极腔内细胞膜，形成全细胞封接，补偿电阻。给与钳制电压-60mV，滤波1KHz，记录乙酰胆碱受体通道电流。不同浓度的ACh和胆红素等通过自制Y型快速加药系统于细胞旁给药。实验所用灌流液中含有1umol/L阿托品，以阻止毒蕈碱受体的活化。数据采用PatchMaster和Origin8.0软件进行分析。结果以均数±标准差(x±s)表示，配对资料t检验，p0.05为有统计学差异。结果：在钳制电压-60mV下，ACh浓度依赖性的诱发一快速激活且快速衰减的内向电流即乙酰胆碱受体电流（ACh-induced currents, IACh）。低浓度（0.5μmol/L）胆红素使100μmol/L的ACh诱发的IACh增加1.13（P0.05）倍，脱敏感衰减率降低8.63%（P0.05）；而高浓度（5.0μmol/L）胆红素使100μmol/L的ACh诱发的IACh分别降低72.61%（P0.05），脱敏感衰减率分别降低96.49%（P0.05）。4μM胆红素干预下，100、200、400、800μM的ACh诱发电流的波幅分别为635.37±172.72、1669.67±177.02、4370.86±206.25和6916.9±73.66（pA）。Forskolin（PKA活化剂）使100μMACh诱发的相对IACh波幅由0.44±0.11降低到0.30±0.96（p0.05），相对脱敏感衰减率由0.05±0.07增加到0.30±0.29（p0.05）；而H-89（PKA抑制剂）使100μM ACh诱发的相对IACh峰值由0.38±0.05增加到0.43±0.08（p0.05），相对脱敏感衰减率由0.004±0.002增加到0.014±0.003（p0.05）。结论：胆红素以可逆性恢复的方式影响SCG细胞IACh。低浓度胆红素明显增强IACh，其机制可能与降低其通道脱敏感衰减率有关；高浓度胆红素竞争性的抑制IACh，其机制可能与胆红素竞争性结合ACh位点有关。胆红素浓度依赖性的降低SCG细胞乙酰胆碱受体通道电流脱敏感衰减率。环磷酸腺苷-蛋白激酶A磷酸化途径也参与了胆红素对IACh的抑制作用的影响。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575
【图文】：

ACh激活nAChRs?

胆红素对大鼠颈上交感神经节细胞乙酰胆碱受体通道电流的影响及其机制

RAG对nAChfis通道电流影响的电流图

ROC对nAChRs电流

【参考文献】