TNF-α对肝细胞脂肪变性模型SCAP-SREBP-1c脂质合成通路的影响

发布时间：2020-07-19 05:41

【摘要】： 目的:通过本研究探讨TNF-α对肝细胞脂肪变性模型固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)表达的影响,探讨TNF-α在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)SCAP-SREBP-1c脂质合成通路中的作用及可能机制。 方法: 1、建立油酸诱导的人肝细胞脂肪变性模型。 2、正常成人L-02肝细胞株,用含10%胎牛血清的1640培养基传代培养,分为对照组和模型组,正常培养基培养的细胞为对照组(简称C组),正常培养基加油酸诱导培养的细胞为模型组(简称F组),另外两组加入TNF-α(C组+TNF-α,简称C1组;F组+TNF-α,简称F1组)。TNF-α终浓度为200ng/mL。 3、油红0染色光学显微镜观察肝细胞脂滴积聚的情况。 4、RT-PCR法检测各组SCAP、SREBP-1c、FAS mRNA表达变化。 5、Western blot法检测各组SCAP、SREBP-1c蛋白表达变化。 6、采用酶底物结合反应检测肝细胞FAS活性变化。 7、检测各组肝细胞内甘油三酯(TG)的含量。 结果: 1、成功地建立了油酸诱导的L-02肝细胞株脂肪变性模型。油红0染色光学显微镜观察对照组细胞内未见红色脂滴。模型组在培养24小时后细胞内即可见少量脂肪变细胞,72小时可见细胞质内聚集了较多橘红色的脂滴。电镜观察对照组细胞质内偶见脂滴出现。模型组肝细胞体积较大,较多脂滴存在于胞质中;核膜迂曲轮廓不清;细胞内线粒体数量减少,基质肿胀,嵴稀疏。 2、油红0染色光学显微镜观察C组未见肝细胞脂肪变,细胞排列紧密,边缘清晰,细胞核清晰可见。C1组可见少量脂肪变细胞,F组可见大量脂肪变细胞,F1组脂变细胞最多,细胞内脂滴数量明显增多,部分融合成较大的脂滴,将细胞核推挤于一侧。 3、各组肝细胞SCAP、SREBP-1c、FAS mRNA表达的比较:C1、F、F1组较对照组增高(P＜0.01),F1组增加最显著。C1组与C组比较、F1组与F组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。 4、SCAP、SREBP-1c蛋白的表达与mRNA表达变化规律一致。 5、FAS活性的比较:C1、F、F1组较C组增高(P＜0.01),其中F1组最高。C1组与C组比较、F1组与F组比较差异有显著意义(P＜0.01),但F1组增加更明显。 6、肝细胞内TG含量的比较:C1、F、F1组较C组增高(P＜0.01),其中F1组最高。C1组与C组比较、F1组与F组比较差异有显著意义(P＜0.01),但F1组增加更明显,表明TNF-α对C组、F组均有作用,但对F组作用更明显。 结论: 1、采用L-02肝细胞株可以成功制作培养的肝细胞脂肪变性模型。 2、TNF-α可上调正常L-02肝细胞及脂肪变性肝细胞SCAP、SREBP-1c、FAS的表达,促进肝细胞内TG的合成与蓄积。 3、TNF-α作用于正常肝细胞时,少数肝细胞也可发生脂肪变性,当作用于模型组时,发生脂肪变性的肝细胞数量较前明显增加,细胞内TG含量也显著增加。TNF-α在脂肪变性的肝细胞更能促进SCAP、SREBP-1c的表达,因此TNF-α除可直接影响肝细胞脂代谢以外,还是加重脂肪变性肝细胞脂代谢紊乱的重要因素。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R575
【图文】：

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.C组.F组S班Br一leSCAP、SREBP一lc蛋白表达的变化CAp蛋白的表达较C组增高(p<0.01)，FI组增加，差异有统计学意义(P<0.01)，但Fl增强更明显，对F组作用更明显(见图14和表10)。

图15westernblot显示SREBP一le蛋白的表达组肝细胞seAP、s咫BP一l。蛋白表达westernblot结果C组CI组F组8.30士13.24256.34士11.47*413.5士32.97*24.30士6.37346.41士15.16*603.4土54.82*较;#:尸<0.01，与F组比较1600140012001000800600400

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本文编号：2761998