荔枝核总黄酮对胆管阻塞型肝纤维化大鼠肝组织TLR2、TLR4表达的影响

发布时间：2020-07-30 08:56

【摘要】：目的：探讨荔枝核总黄酮（total flavone of Litchi ChinensisSonn,TFL）对胆管阻塞型肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体2(toll-likereceptor2,TLR2)、Toll样受体4（toll-like receptor4,TLR4）蛋白表达的影响及其抗肝纤维化可能的作用机制。方法：雄性SD大鼠80只，随机分为假手术组、胆总管结扎组、胆总管结扎+TFL小剂量（100mg·kg-1·d-1）组（以下简称TFL小剂量组）和胆总管结扎+TFL大剂量（200mg·kg-1·d-1）组（以下简称TFL大剂量组）。除假手术组外，其余各组均采用胆总管结扎法（common bile duct ligation,CBDL）制备肝纤维化大鼠模型。在造模后第二日开始，假手术组、胆总管结扎组给予生理盐水5ml/kg灌胃，TFL小剂量组、TFL大剂量组分别给予TFL100mg/kg、200mg/kg灌胃，均1次/天，共4周，第4周末处死全部大鼠，留取肝脏左叶组织。HE、Masson染色观察大鼠肝组织病理学改变；免疫组化法(immunohistochemistry，IHC)及免疫印迹法（Western blot，WB)检测TLR2、TLR4在四组大鼠肝组织内的表达。结果：Masson染色结果显示：假手术组、胆总管结扎组、TFL小剂量组、 TFL大剂量组的胶原面积（μm2）分别为：377.4±19.8、1172.5±108.4、1092.7±105.2、772.9±168.9；胆总管结扎组胶原纤维面积与假手术组比较差异显著（P0.01），TFL大剂量治疗组胶原纤维面积与胆总管结扎组相比有显著性差异（P0.01）,TFL小剂量治疗组胶原纤维面积与胆总管结扎组相比无差异。免疫组化染色提示：TLR2、TLR4主要表达于肝细胞、库普弗细胞、内皮细胞以及胆管上皮细胞等多种细胞的细胞质和细胞膜。假手术组肝组织内TLR2、TLR4蛋白呈阴性或弱阳性表达，胆总管结扎组肝组织中TLR2、TLR4的蛋白表达均明显高于假手术组，呈淡黄色、棕黄色或棕褐色染色，差异有统计学意义（P0.01）。TFL小剂量组肝组织内TLR2、TLR4蛋白阳性表达低于胆总管结扎组，差异无统计学意义（P0.05）。TFL大剂量组肝组织内TLR2、TLR4蛋白表达较胆总管结扎组明显降低，大部分以淡黄色染色为主，偶见棕黄色及棕褐色染色，差异有统计学意义（P0.01）。假手术组、胆总管结扎组、TFL小剂量组、 TFL大剂量组的TLR2阳性细胞表达评分分别为：0.6±0.5、4.0±0.9、3.8±0.9、1.8±0.7；四组TLR4阳性细胞表达评分分别为：0.4±0.5、3.3±0.6、3.1±0.5、1.4±0.5；蛋白质印迹法检测假手术组、胆总管结扎组、TFL小剂量组、TFL大剂量组的TLR2蛋白表达结果分别为：0.4±0.0、0.7±0.1、0.7±0.0、0.5±0.0；WB法检测上述各组TLR4蛋白表达结果分别为：0.3±0.0、0.6±0.1、0.6±0.0、0.4±0.0；假手术组肝组织TLR2、TLR4蛋白有少量表达，胆总管结扎组肝组织中TLR2、TLR4的蛋白表达均明显高于TFL大剂量治疗组，差异有统计学意义（P0.01），TFL小剂量治疗组肝组织内TLR2、TLR4蛋白阳性表达与模型组相比降低，但仍明显高于假手术组，差异有统计学意义（P0.01）。结论：TLR2和TLR4蛋白表达增加可能与胆总管结扎大鼠肝纤维化的发生发展有关，大剂量TFL能抑制肝纤维化大鼠肝组织TLR2、TLR4的表达，并改善胆总管结扎大鼠肝组织纤维化程度。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.2
【图文】：

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图 2. 各组大鼠肝组织HE染色（X200）A:假手术组; B:BDL组;C:TFL小剂量组;D:TFL大剂量组Figure 2 The histopathological changes in rats liver tissue were assessed by HE staining(×200). A:sham-operated group, B:bile duct ligation group(BDL), C:BDL with low-doseTFL treatment group,D:BDL with high-dose TFL treatment group25

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图 3. 各组大鼠肝组织Masson染色图片（X100）A:假手术组;B:BDL组;C:TFL小剂量组;D:TFL大剂量组Figure 3 The histopathological changes in rats liver tissue were assessed by Masson staining (×100).A:sham-operated group, B:bile duct ligation group(BDL), C:BDL with low-dose TFL treatmentgroup,D:BDL with high-dose TFL treatment group

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图 4. 各组大鼠肝组织TLR2蛋白免疫组织化学染色(x400) A:假手术组; B:BDL组; C:TFL小剂量组; D:TFL大剂量组Figure 4 The expressions of TLR2 in rats liver tissue were assessed by immunohistochemicalstaining(×400）.A:sham-operated group, B:bile duct ligation group(BDL), C:BDL with low-dose TFLtreatment group,D:BDL with high-dose TFL treatment group29

【参考文献】