大鼠骨髓间充质干细胞移植后在肠功能障碍模型中肠道的定植

发布时间：2020-07-31 08:31

【摘要】： 肠功能障碍可使整个机体处于较为严重的营养不良状态。而在目前的治疗方案中,肠外营养支持可改善患者的营养状况,维护肠屏障功能,但长期肠外营养可出现肝功能损害和骨质疏松症等并发症。肠移植可从根本上治愈肠功能障碍,但其的较高的总体的失败率和高费用又限制了其在临床中的广泛开展。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)是来源于中胚层的多能祖细胞,具有自我更新和向中胚层其它细胞分化的能力。在机体组织受损伤时,经骨髓动员到达损伤部位,可在局部微环境诱导下分化为特异的组织细胞,参与自身修复。加之骨髓间充质干细胞具有的低免疫原性、取材方便,易培养,增殖快的特点,已使之成为组织工程中理想的种子细胞。骨髓间充质干细胞作为细胞治疗和基因治疗的种子细胞,已经广泛应用于心血管、神经系统、呼吸和创伤等方面的基础研究,部分成果已用于临床。而在骨髓间充质干细胞治疗肠道方面,国内外相关研究较少,本课题将骨髓间充质干细胞治疗应用于肠功能障碍的大鼠模型,并观察其在肠道内的定植和疗效。研究目的 1、完成雄性大鼠的骨髓间充质干细胞分离、培养、鉴定、染色工作。 2、制备腹部开放伤合并海水浸泡的大鼠模型,并完善相关指标的检测,证实其存在肠功能障碍,为后续的骨髓间充质干细胞回输治疗和检测奠定基础。 3、采用荧光标记和基因标记双示踪的方法来观察回输的雄性大鼠的骨髓间充质干细胞在雌性大鼠致伤肠道内的定植,并检测空肠组织中的丙二醛(malondialdehydeMDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase SOD)含量。研究方法 1、分离、培养、鉴定、染色雄性大鼠的骨髓间充质干细胞。 2、制备腹部开放伤合并海水浸泡致肠功能障碍的雌性大鼠模型,检测不同时间段空肠组织中的MDA和SOD的含量,制作HE染色病理切片。 3、致伤模型建立后即通过鼠尾静脉将以CM-DiI染色标记的雄性大鼠的骨髓间充质干细胞输入治疗组的雌性大鼠体内,对照组仅输入生理盐水。 4、治疗结束后分别于3天、7天、14天、28天、56天分批取空肠组织,制备冰冻切片在荧光显微镜观察供体细胞在肠道的定植,组织匀浆后行RT-PCR检测雄性大鼠的性别决定基因(sex determination region Y gene SRY)和MDA和SOD含量。结果 1、与正常对照组比较,腹部开放伤合并海水浸泡结束后1小时至第3天的肠组织中MDA含量呈进行性上升,而SOD含量则出现进行性下降,随后二者与对照组的差异呈逐渐减小的趋势,14天后与对照组比较已无明显差异。 2、雌性大鼠肠组织中SRY的RT-PCR检测结果为：3天阳性率为50%,7天阳性率66.6%,14天阳性率33.3%,28天和56天阳性率为16.6%。 3、骨髓间充质干细胞治疗组第3天和第7天的空肠组织中的MDA、SOD含量较之对照组有统计学差异。结论 1、腹部开放伤合并海水浸泡可导致大鼠肠功能障碍。MDA和SOD是反映肠组织氧自由基损伤和抗氧化修复能力较好的指标. 2、移植的雄性大鼠的骨髓间充质干细胞可在雌性大鼠致伤肠组织内定植,但随着时间延长,存活细胞数量逐渐下降。 3、骨髓间充质干细胞移植治疗可加速肠道损伤的恢复,其发挥疗效主要是通旁分泌的形式促进机体内源性修复,而不是直接分化受损组织细胞。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R574;R457.7
【图文】：

CM一DII染色后BMSCS(悬浮)义40

大鼠骨髓间充质干细胞移植后在肠功能障碍模型中肠道的定植

CM一Dll染色J而BMSCS(夕!，I}壁)K4OO

肠绒毛

1、肠粘膜病理组织学改变:海水浸泡后肠粘膜损伤明显，HE染色观察到粘膜厚度和绒毛高度较之正常对照组均有显著减少，可见较多的淋巴细胞浸润，绒毛内淋巴管和毛细血管扩张。(图1、2)图1、正常对照组肠绒毛HEX40可见少量淋巴细胞浸润，未见小血管扩张。图2、BZ组模型建立3d后 HEX40肠绒毛水肿，上皮细胞萎缩，淋巴管和毛细血.管扩张，红细胞聚集。2、C组大鼠空肠组织中MDA和SOD检测结果(表l)表l、MDA和SOD含量t匕较万士，实验组检测项目对照组 llhh33hh1122hh2244hh33dd77dd1144dd MDA(nmol/mgPro) SOD(U/mgPro) 1.99均 23236却41#4.8牡0.49*6.09士0.42*6.78士0一20*7.6肚0.56*2.2肚0.11#2.04均.45 4.32土 0.463.8肚 0.46#2.07士0.18*1.90切.23*1.47士0.13*1.01士0.22*3.91士0.19#4.36士0.43#:与正常对照组比较尸<0.05*:与正常对照组比较尸<0.01从表中可看出，打捞出水后lh被测指标即出现明显变化，随着时间推移与对照组的差异进一步明显，MDA在3d达到变化的峰值

【参考文献】