幽门螺杆菌左氧氟沙星耐药及gyrA基因突变检测研究

发布时间：2020-07-31 08:13

【摘要】： 目的: 分离培养胃粘膜幽门螺杆菌(Helicobacter pyroli,H.pylori),鉴定并进行左氧氟沙星耐药性分析;分析左氧氟沙星耐药菌株与敏感菌株之间gyrA基因的DNA序列差异,探索gyrA基因突变在H.pylori左氧氟沙星耐药产生过程中的作用,并制备gyrA基因突变检测芯片。 方法: 将胃镜活检粘膜标本,接种于H.pylori选择性培养基,37℃微需氧环境培养3～5天,分离H.pylori菌株,采用传统方法和UreA基因PCR扩增鉴定。左氧氟沙星药敏试验采用E-test法,筛选出耐药菌株和敏感菌株。提取H.pylori菌株基因组DNA,PCR扩增gyrA全基因并进行测序并分析。设计并合成寡核苷酸探针并荧光标记引物,制备gyrA基因突变芯片,检测临床分离H.pylori菌株。 结果: 38例H.pylori菌株药敏试验发现耐药菌12例,结占31.58%。gyrA全基因测序结果显示10例耐药菌株存在261、271和272位点突变;C261A突变2例,C261G突变1例,G271A突变2例,A272G突变2例,C261A与G271T、A272G突变2例,G271A与A272G突变1例,而在26株敏感菌株未发现突变。基因芯片检测结果与PCR产物直接测序结果一致。 结论: 本地区分离H.pylori的临床菌株左氧氟沙星耐药率较高,其耐药与gyrA基因261、271和272位点有关;构建的H.pylori gyrA基因突变检测芯片能准确、快速鉴定gyrA基因突变,为临床个体化医疗提供完整的数据,为进一步深入研究H.pylori左氧氟沙星耐药机制与gyrA基因突变关系提供了技术支持,而且对临床H.pylori的左氧氟沙星治疗具有一定指导意义。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R573;R450
【图文】：

HPyfori平皿培养结果

HPylori革兰染色镜检(1000x

图3.3部分HPylori菌株UreA基因PcR扩增结果3.2左氧氟沙星药敏试验38例临床分离 HPyzori菌株通过左氧氟沙星E一test药敏试验，见图3.4，结果12例Mlc大于1，ou留ml，耐药菌株占 31.58%，敏感菌株占68.42%;见表3.1及图3.5。图3.4左氧氟沙星E一test药敏试验

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 胡伏莲;;中国幽门螺杆菌耐药研究现状[J];胃肠病学和肝病学杂志;2008年07期

2 高文;胡伏莲;;幽门螺杆菌感染与胃肠道外疾病[J];中国医刊;2007年02期

本文编号：2776211