还原性谷胱甘肽对LO2细胞脂肪变性中凋亡的影响

发布时间：2020-07-31 19:04

【摘要】：目的选择软脂酸建立体外NAFLD脂肪变性肝细胞模型,动态观察脂肪变性肝细胞凋亡及线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO的表达情况；并以还原性谷胱甘肽作为干预因素,探讨其对NAFLD肝细胞凋亡的影响及可能的机制。 方法 1、选用软脂酸诱导L02细胞建立体外NAFLD肝细胞脂肪变性模型,实验分为正常对照组和软脂酸模型组,设24、48、72小时3个时间点,油红0染色观察细胞内脂肪变性情况,Annexin/PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学法测定Smac/DIABLO蛋白的表达。 2、根据第一部分实验结果选择软脂酸诱导肝细胞凋亡中凋亡率(?)PSmac/DIABLO表达最明显的时间点作为干预时间,MTT法确定还原性谷胱甘肽最适浓度范围,实验分为正常对照组、软脂酸模型组及还原型谷胱甘肽(低、中、高浓度)干预组,采用上述方法观察各组凋亡率及Smac/DIABLO蛋白的表达。 结果 1、(1)用软脂酸诱导L02肝细胞脂肪变性成功建立NAFLD体外细胞模型。油红0染色显示,软脂酸孵育24小时即见肝细胞胞浆内出现橘红色的脂滴,随着诱导时间的延长,脂滴逐渐增多甚至互相融合。 (2)软脂酸模型组的细胞凋亡率随诱导时间延长呈明显的上升趋势,24、48、72h组与对照组比较有统计学意义(P0.05)。 (3)免疫细胞化学结果显示正常对照组肝细胞在48、72h时有个别细胞出现Smac/DIABLO表达,呈弱阳性；软脂酸模型组Smac/DIABLO阳性率随培养时间延长逐渐增强,与正常对照组比较有统计学差异(P0.05)。 2、(1)MTT的结果显示不同浓度GSH对L02细胞产生不同影响。当GSH浓度≤20μmol/L时,细胞存活率在80%以上；而当GSH浓度≥40μmol/L时,细胞存活率明显下降,表现出明显的抑制效应。故选择GSH5、10、20μmol/L作为适宜的后续浓度。 (2)给予GSH干预后发现,GSH(低、中、高)浓度组能均减少细胞凋亡率和Smac/DIABLO的表达,与软脂酸模型组比较有统计学差异(P0.05),并且随着浓度增加其保护作用越明显。 结论 1、软脂酸可成功诱导L02肝细胞脂肪变性,建立体外NAFLD细胞模型。 2、线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO可能参与了软脂酸诱导的体外NAFLD肝细胞凋亡； 3、还原性谷胱甘肽可能通过下调Smac/DIABLO蛋白的表达,抑制细胞凋亡发生。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.5

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本文编号：2776880