重组人尿胰蛋白酶抑制剂对实验性胰腺炎动物的保护作用及其机理研究

发布时间：2020-08-08 15:36

【摘要】： 目的:探讨重组人尿胰蛋白酶抑制剂(rhUTI)对实验性胰腺炎动物的保护作用及其可能的作用机制,为其申报国家一类新药与临床应用提供理论依据。方法: 1.采用2%牛磺胆酸钠(0.1mL/100g,0.2mL/min)胰胆管逆行注射法制备急性胰腺炎大鼠模型。将实验大鼠随机分成6组:即对照组、模型(AP)组、rhUTI(1.75、3.5、7万U/kg)3个不同剂量组及阳性药乌司他丁(UTI,3.5万U/kg)组,每组10只。实验结束时,分别检测大鼠血清淀粉酶、尿液淀粉酶、血常规、肾功能、电解质以及胰腺病理组织学损伤的变化。 2.采用2.5%牛磺胆酸钠(1ml/kg)胰胆管逆行注射法制备急性胰腺炎犬模型。将实验犬随机分成6组:即对照组、模型(AP)组、rhUTI(0.75、1.5、3万U/kg)3个不同剂量组及阳性药乌司他丁(UTI,1.5万U/kg)组,每组6只。实验结束时,分别检测犬血清淀粉酶、尿液淀粉酶、血常规、肾功能、电解质以及胰腺病理组织学损伤的变化。 3.采用TUNEL法检测急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡情况;采用免疫组化染色法分别观察急性胰腺炎大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白表达的变化;采用RT-PCR法分别检测急性胰腺炎大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L和Caspase-3mRNA表达的变化。结果: 1.经胰胆管逆行注射2%牛磺胆酸钠成功制备急性胰腺炎大鼠模型,与对照组比较,AP组大鼠的血清淀粉酶、尿液淀粉酶,红细胞计数,尿素氮、肌酐升高,血清Ca2+降低,胰腺组织充血水肿、灶性坏死并伴有大量炎性细胞浸润。与AP组比较,UTI(3.5万U/kg)及rhUTI(3.5、7万U/kg)对升高的血清淀粉酶、尿液淀粉酶有降低作用,UTI和rhUTI各剂量组胰腺组织充血水肿减轻、坏死灶减小,炎性细胞浸润减轻,但UTI和rhUTI各剂量对急性胰腺炎大鼠血常规、肾功能和电解质变化均未见明显影响。 2.经胰胆管逆行注射2.5%牛磺胆酸钠成功制备急性胰腺炎犬模型,与对照组比较,AP组犬血清淀粉酶于造模后24h、28h和32h升高,且32h达到高峰,尿液淀粉酶于造模后32h升高,胰腺组织充血水肿、灶性坏死并伴有大量炎性细胞浸润,血清K+和Ca2+分别于造模后24h、8h降低,血常规、肾功能均未见明显变化。与AP组比较,UTI和rhUTI各剂量于造模后28h、32h对升高的血清淀粉酶有降低作用,rhUTI(1.5、3万U/kg)和UTI(1.5万U/kg)对升高的尿液淀粉酶有降低作用,胰腺病理组织学检测结果表明:UTI和rhUTI各剂量组胰腺组织充血水肿减轻、坏死灶减小,炎性细胞浸润减轻。 3. TUNEL法检测结果显示,正常组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡极少,急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡指数升高,病变程度较重的模型组凋亡细胞少见,与AP组比较,UTI及rhUTI各剂量组凋亡细胞明显增多。免疫组化及RT-PCR结果显示,在正常组大鼠胰腺组织中即有Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白及mRNA的弱阳性表达,与对照组比较, AP组大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L和Caspase-3的蛋白及mRNA表达水平均降低;与AP组比较,UTI和rhUTI各剂量组大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L和Caspase-3的蛋白及mRNA表达水平明显升高,且Caspase - 3表达水平在各个组间的变化趋势与Fas/Fas-L系统的变化趋势相一致。结论: rhUTI对急性胰腺炎大鼠和犬有一定的保护作用,可抑制淀粉酶活性,改善胰腺组织的病理性损伤,其作用机制可能与促进胰腺腺泡细胞凋亡,上调胰腺组织中Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白及mRNA表达有关。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R576
【图文】：

急性胰腺炎,组织病理,血清淀粉酶,尿液

图 1 rhUTI 对急性胰腺炎大鼠胰腺组织病理形态学变化的影响（×200，n=8）Fig 1 Effect of rhUTI on pathological changes of the pancrea in acute pancreatitis rats（×200，n=8）A：control；B：model；C：UTI (35,000U/kg)；D：rhUTI(17,500U/kg)；E：rhUTI(35,000U/kg)；F：rhUTI(70,000 U/kg)4.2 rhUTI 对急性胰腺炎犬的保护作用4.2.1 rhUTI 对急性胰腺炎犬血清淀粉酶、尿液淀粉酶的影响采用化学比色法检测犬血清淀粉酶和尿液淀粉酶的变化，结果显示：与对照组比较，AP 组犬造模后 24h、28h、32h 血清淀粉酶明显升高，且于 32h 达到高峰；与 AP 组比较，rhUTI 和 UTI 于造模后 28、32h 对升高的血清淀粉酶有降低作用。与对照组比较，AP 组犬造模后 32h 尿液淀粉酶显著升高，用药组中，rhUTI（1.5、

急性胰腺炎,血性腹水,胰腺

4.2.5.1 肉眼观察犬胰腺组织变化行上腹部正中切口进腹，对照组犬胰腺正常，呈粉红色扁平长带状；模型组犬可见大网膜、腹膜及肠壁多处皂化、黏连、脂肪坏死，并伴有不同程度的血性腹水，肠壁变薄、水肿，整个胰腺大部呈出血性或凝固性坏死；各用药组胰腺轻度水肿、充血，灶性坏死，伴有不同程度腹水或血性腹水。4.2.5.2 镜检犬胰腺组织病理学改变犬胰腺组织病理学变化如图2所示，对照组胰腺结构基本正常，仅见叶间隙稍增宽；AP组胰腺组织间质明显水肿、小叶间隙增宽、腺体片状出血、坏死，大量炎症细胞浸润，损伤程度明显比对照组严重；UTI及rhUTI组腺体结构清晰，胰腺组织轻度水肿，腺泡细胞灶性坏死，可见炎症细胞浸润及红细胞溢出，但较模型组有所减轻，表明rhUTI对急性胰腺炎动物胰腺组织病理性损伤具有改善作用。

腺泡细胞,急性胰腺炎,凋亡

4.3 rhUTI对急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响Tunel法检测显示腺泡细胞凋亡表现为细胞核染成棕褐色，胞核固缩、空泡化，染色质浓缩、边聚，凋亡小体形成。结果可见正常组胰腺腺泡细胞凋亡极少，急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡指数升高，病变程度较重的模型组凋亡细胞少见，与AP组比较，UTI及rhUTI各剂量组凋亡细胞明显增多。表明rhUTI可促进急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡。见图3，表17。

【参考文献】