细胞白介素2基因佐剂对乙型肝炎疫苗效果影响的研究

发布时间：2020-08-14 19:58

【摘要】：目的:研究含白细胞介素2(IL-2)基因的重组质粒pcDNA3.1/IL-2对乙肝重组蛋白疫苗(HBsAg)和乙肝DNA疫苗的免疫效果的影响。方法:利用分子生物学技术构建含IL-2基因的重组质粒pcDNA3.1/IL-2并测序,碱裂解法大量提取并经Sepharose 4FF柱层析纯化重组质粒pcDNA3.1/IL-2和pcDNA3.1/S。豚鼠分为六组:第1组为空白对照组;第2组为铝佐剂+ HBsAg组;第3组为IL-2+ HBsAg组;第4组为重组质粒pcDNA3.1/IL-2+ HBsAg组;第5组为重组质粒pcDNA3.1/IL-2+pcDNA3.1/S组;第6组为重组质粒pcDNA3.1/S组。于豚鼠的大腿内侧肌肉免疫,免疫质粒200μg、HBsAg 10μg,各组于第一次免疫一月后分别加强免疫一次,心脏采血(第一月每周一次,加强免疫后两周一次),分离血清,ELISA检测豚鼠血清中抗HBsAg抗体的滴度和CTLL-2细胞株/MTT法测定IL-2活性。结果:序列测定和分析结果表明重组质粒pcDNA3.1/IL-2构建正确。血清中抗HBsAg抗体的滴度测定结果:12周后,第2组为2116mIU;第3组为1987mIU;第4组为2252mIU;第5组为67.19mIU;第6组为50.88mIU。IL-2活性的测定结果表明在重组质粒pcDNA3.1/IL-2免疫一周后,IL-2表达水平达高峰,以后逐渐降低,但一月后IL-2水平仍高于空白对照组。对抗HBsAg抗体的滴度测定结果和IL-2活性的测定结果进行统计学分析表明:各组之间比较p0.05,差异显著。结论:含IL-2基因的重组质粒pcDNA3.1/IL-2可以增强乙肝疫苗(乙肝重组蛋白疫苗和乙肝DNA疫苗)的免疫效果,可作为佐剂使用。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R512.62
【图文】：

18图 1. 真核表达质粒 pcDNA3.1/IL-2 构建示意图Fig1. Construction of expression plasmid: pcDNA3.1/IL-2

26图 2. IL-2 PCR 扩增产物分析2. Analysis of IL-2 PCR products by amplificane 1：IL-2 gene PCR products Lane2：TaKaRa DL-20L-2 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ双酶切的鉴定结 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ进行双酶切消化，于到预计的电泳带，电泳照片见图 3。L-2 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ双酶切后 IL-2 片 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ进行双酶切消化，LM，紫外灯下观察，得到一条 600bp 的电泳带

18T/IL-2 EcoRⅠ/Hind Ⅲ酶切及 IL-2 片段. Analysis of PMD18T/IL-2 by restriction enz DNA/HindⅢ Marker Lane2：EcoRⅠ/Hind Ⅲ digestL-2000 Marker Lane4：DL-2000 Marker-2 products3.1 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ双酶切后目的片 经 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ双酶切消化，LMP 回收外灯下观察，得到一条大于 5kb 的电泳带，电cDNA3.1/IL-2 的酶切鉴定结果 以 EcoRⅠ和 Hind Ⅲ进行双酶切消化，于预计的电泳带，电泳照片见图 4。

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本文编号：2793480