去氨加压素和垂体后叶素对肝星状细胞增殖、收缩及分泌的影响研究

发布时间：2020-08-15 19:25

【摘要】：目的 醋酸去氨加压素和垂体后叶素是目前临床上治疗肝硬化食管胃底静脉曲张出血的常规用药,通过直接或间接地引起内脏血管收缩减少门静脉血流量以降低门静脉压力,减少侧支血流,从而治疗门脉高压导致的食管胃静脉曲张破裂出血。然而,醋酸去氨加压素和垂体后叶素在肝硬化患者使用过程中是否也同时作用于肝星状细胞,引起肝星状细胞功能和形态的改变,从而对肝窦血管阻力产生影响,目前尚不得而知。而肝星状细胞形态和功能的变化对调整肝窦血管阻力和门静脉压具有重要作用,因此研究醋酸去氨加压素和垂体后叶素对肝星状细胞功能和形态影响,对深入探讨该类药物影响门静脉高压的分子机制具有指导意义。 基于以上问题,本实验对比研究醋酸去氨加压素和垂体后叶素对肝星状细胞增殖、收缩及分泌功能的影响,进而探讨该两种药物对肝星状细胞形态和功能方面的影响。 方法 本研究以人肝星状细胞LX-2(HSC LX-2)为研究对象,设置空白对照组,醋酸去氨加压素药物组和垂体后叶素药物组。其中每种药物又分别设置低浓度(等同于临床常规用药的体内血清药物浓度)、中浓度(等同于常规用药血清药物浓度的10倍)、高浓度(等同于常规用药血清药物浓度的100倍)三个组。分别进行以下三个方面的研究：(1)采用wst-1(水溶性的四唑盐)方法分别检测以上各组于450nm处光密度值,观察不同组别的HSC增殖状况；(2)通过显微镜下观察细胞形态和拍照后方格纸计算胶原凝胶板面积比法,研究这两种药物对HSC收缩功能的影响；(3)采用ELSA方法检测各组细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、转化生长因子(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的浓度,探讨醋酸去氨加压和垂体后叶素对HSC分泌功能的影响。 结果 (1)空白对照组、醋酸去氨加压素低浓度组(1×10-10mol/L组)及中浓度组(1×10-9mol/L组)的OD450分别为0.458±0.015、0.459±0.017和0.467±0.024,两两比较P0.05,无统计学差异,而高浓度醋酸去氨加压素组(1×10-8mol/L组)为0.436±0.015,与空白对照比较P0.05,具有统计学差异；垂体后叶素浓度由低到高(0.1U/L组、1U/L组、10U/L组)OD450值分别为：0.495±0.011,0.507±0.015和0.501±0.009,与空白对照组比较均为P0.05,具有统计学差异。(2)醋酸去氨加压素各组胶原凝胶板面积比(77.07±4.42%、75.85±3.70%、72.74±3.92%)与空白对照组(77.40±4.56%)比较均无显著统计学差异(P0.05)；而垂体后叶素各组胶原凝胶板面积比较对照组均明显减小(57.83±3.96%、50.28±6.69%、43.56±7.68%),有显著性差异(P0.01)。这两种药物对应浓度组比较,垂体后叶素引起的凝胶板面积缩小更明显。(3)低浓度醋酸去氨加压素组测得MMP-2浓度(13.321±0.098ng/ml)较空白对照组(12.281±0.169 ng/ml)升高,且P0.01,中浓度组(12.230±0.153 ng/ml)与空白对照组差别无统计学意义,高浓度组(12.061±0.126ng/ml)较空白对照组减低,P0.05；垂体后叶素各药物浓度组(12.899±0.150 ng/ml、13.662±0.152 ng/ml、13.698±0.119 ng/ml)较空白对照组中MMP-2浓度比较均升高,均有显著的统计学差异。醋酸去氨加压素各组TGF-β1浓度(5.233±0.102pg/ml、17.749±0.188 pg/ml、36.060±0.227 pg/ml)较对照组(0.751±0.083pg/ml)均升高,均P0.01,并呈现药物浓度依赖关系；垂体后叶素各组TGF-β1浓度(15.615±0.099pg/ml.38.460±0.029pg/ml.49.053±0.115 pg/ml)较对照组均明显升高,均P0.01。两种药物对应浓度组相比较,垂体后叶素刺激HSC产生的TGF-β1作用更强。醋酸去氨加压素组测得Ⅰ型胶原浓度(分别为7.024±0.122ng/ml.7.027±0.087ng/ml.7.028±0.106 ng/ml)较对照组(7.012±0.391ng/ml)差异均无统计学意义；低浓度垂体后叶素组测得Ⅰ型胶原浓度(7.106±0.168ng/ml)与对照组比较,无统计学差异,而中浓度组和高浓度组Ⅰ型胶原浓度(7.207±0.160 ng/ml、7.212±0.281 ng/ml)升高较对照组具有显著性差异。醋酸去氨加压素组测得Ⅲ型胶原浓度分别为7.397±0.128ng/ml、7.739±O.282 ng/ml、7.746±0.169 ng/ml,与对照组(7.395±0.290ng/ml)比较均无统计学差异；低浓度垂体后叶素组Ⅲ型胶原浓度(7.506±0.324ng/ml)与对照组比较,无统计学差异,而中浓度组和高浓度组Ⅲ型胶原浓度(7.802±0.162ng/ml.7.823±0.195 ng/ml)升高较对照组具有显著性差异,P0.05。 结论 上述结果表明：(1)垂体后叶素能明显促进HSC增殖,而醋酸去氨加压素对HSC增殖无明显影响；(2)垂体后叶素能明显引起HSC收缩及形态变化,而醋酸去氨加压素对HSC收缩无明显影响；(3)常规用药剂量的垂体后叶素对HSC产生MMP-2有促进作用,但对胶原分泌无明显影响,而药浓度更高时对MMP-2及胶原分泌均有促进作用,醋酸去氨加压素未见明显的促进HSC产生MMP-2、胶原I及Ⅲ的作用,但两种药物均有一定促进HSC分泌TGF-β1的作用。醋酸去氨加压素和垂体后叶素能引起HSC功能或／及形态的改变,两者均具有潜在的增加肝窦血管阻力作用,且两者比较去氨加压素对HSC的影响更小。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575.2
【图文】：

各组咖P一2浓度对比图

分组浓度(Pg/ml)空白对照组醋酸去氨加压索1只一0一，omol/L组1只10一gmol/L组l又10，smol/L组垂体后叶索0.IU/L组IU/L组IOU/L组一一一~丫表示与对照织l一匕较P<0·()l0.751士0.0835.233士0.10217.749士0.18836.060士0.22715.615士0.09938.460士0.20949053士0.115

卜{;毛.川小1.习浓度垂体后叶索‘!一(;「户睁l变化曲线图3.邹小同浓度酩酸去氮加Jf、索一I(iI:日l变化曲线山句结果显示:，。对照组比较，醋酸去氮力llJ区素和垂体后时一索均可以促进11义分泌TGF一pl，均呈浓度依赖关系。并且垂体后叶素较醋酸去氨加压素对日SC表达T(下一日l的促进作用更强烈。3.3醋酸去氨加压素及垂体后叶素对人HsC分泌I型胶原的影响

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本文编号：2794540