非诺贝特对胆道梗阻肝损伤治疗作用的影响

发布时间：2020-08-23 14:46

【摘要】：目的：胆管结扎致胆道完全梗阻,梗阻性黄疸(obstructive jaundice, OJ)形成,由于胆固醇排泄完全堵塞,高脂血症形成。贝特类药物通常用于血脂障碍的治疗,可显著调节高甘油三酯、胆固醇水平。因此推测非诺贝特有可能对梗阻性黄疸肝损伤起保护作用。为了进一步观察非诺贝特是否对梗阻性黄疸肝损伤起保护作用,以便用于临床,本研究探讨了胆管结扎后大鼠用不同剂量非诺贝特治疗后,梗阻性黄疸大鼠血清肝功、细胞因子、肝细胞凋亡、肝糖原及其肝组织胶原纤维含量的变化情况。研究方法： 1.大鼠OJ模型的建立与分组用胆总管结扎法建立大鼠0J模型。雄性Wistar大鼠,随机分为4组(每组12只)：空白对照组(A)、OJ模型组(B)、低剂量非诺贝特处理组(C)、高剂量非诺贝特处理组(D)。除A组外,其余各组均行胆总管结扎术。手术过程：剖腹术后游离总胆管,用5/0线结扎,最后关腹。C组每天经口灌胃非诺贝特30mg/kg,D组每天经口灌胃非诺贝特60mg/kg。 2.各种生化指标的检测各组大鼠乙醚吸入麻醉后剖腹取腹主动脉血。全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、ALP, GGT、TBA。放射免疫分析试剂盒检测血清IL-1β和TNF-α。 3.肝组织细胞凋亡、胶原纤维、糖原检测各组大鼠放血处死后取肝组织,制作石蜡切片。TUNEL法检测肝细胞凋亡,PAS染色检测肝糖原含量,Masson染色检测胶原纤维含量。结果： 1.大鼠一般情况观察大鼠胆管结扎24h内,即可出现大便陶白色,小便黄染,精神萎靡,活动迟钝,饮食减少等症状。C组、D组胆管结扎后通过给予不同剂量的非诺贝特药物,其病情进展延缓。各组大鼠体重变化如下：A组大鼠实验后体重较实验前显著升高(P0.01),B组大鼠实验后体重较实验前显著降低(P0.01),C、D组大鼠实验后体重较实验前无显著统计学差异(P0.01)。 2.大鼠血清生化指标分析 2.1 OJ大鼠与正常大鼠血清生化指标的比较胆管结扎7d后,B、C、D组大鼠各血清指标与A组相比：ALT、AST、ALP、GGT的活性均显著高于A组(P0.01)；TBA、TNF-α的含量明显高于A组(P0.01)；B、C组IL-1β显著高于A组(P0.01),D组较A组无显著统计学差异(P0.01)。 2.2药物处理后各组大鼠血清生化指标的比较药物处理后,D组ALT、AST、ALP、GGT、TBA、IL-1β、TNF-α显著低于B组(P0.01),D组AST、ALP、GGT、TBA、IL-1β显著低于C组(P0.01),D组ALT、TNF-α较C组无显著统计学差异(P0.01)。C组IL-1β显著低于B组(P0.01),而ALT、AST、ALP、GGT、TBA、TNF-α较B组无显著统计学差异(P0.01)。 3.肝组织细胞凋亡、糖原检测、胶原纤维 3.1各组大鼠肝组织细胞凋亡数目比较 TUNEL染色显示紫蓝色颗粒为凋亡阳性细胞。镜下可见B组肝细胞凋亡多于A、C、D组,肝细胞分布欠佳,大小较一致；C组肝细胞凋亡少于B组,肝细胞分布欠佳,大小较一致；D组肝细胞凋亡少于B、C组,肝细胞分布较均匀,大小较一致,偶见肝细胞增大；A组无或偶见肝细胞凋亡,其数目明显低于B、C、D组,肝细胞分布较均匀,大小较一致,可见数个肝细胞增大。定量分析显示：胆总管结扎后,B组、C组、D组肝细胞凋亡数目显著高于A组(P0.01)。给予不同剂量非诺贝特药物处理后,C组、D组肝细胞凋亡数目显著低于B组(P0.01),D组肝细胞凋亡显著低于C组(P0.01) 3.2各组大鼠肝组织糖原颗粒数目检测 PAS染色显示肝糖原颗粒呈亮红色。镜下可见A组细胞结构致密完整,排列较整齐,无裂隙,细胞间、细胞内PAS染色为弥漫强着色；B组细胞形态尚完整,间质细胞显著增生,裂隙大,排列欠规则,以汇管区为著,细胞间、细胞内PAS染色少且相对均匀性差；C组细胞形态排列尚好,间质显著增生,裂隙小,以汇管区为著,细胞间、细胞内PAS染色相对单薄,呈不均匀样,但好于B组；D组细胞形态致密较完整,间质增生明显减少,裂隙较小,排列较规则,以汇管区为著,细胞间、细胞内PAS染色较多且相对均匀性好。定量分析显示：胆总管结扎后,B组、C组、D组大鼠肝组织阳性颗粒数目显著低于A组(P0.01)。给予不同剂量非诺贝特药物处理后,C组、D组大鼠肝组织阳性颗粒数目显著高于B组(P0.01),D组大鼠肝组织阳性颗粒数目显著高于C组(P0.01) 3.3各组大鼠肝组织胶原纤维面积比较 Masson染色显示胶原纤维呈蓝色。镜下可见A组仅在中央静脉以及小胆管周围出现少量的胶原纤维,其分布均匀,排列整齐；B组胶原纤维显著增多,大量分布于增生小胆管周围,排列紊乱；C组胶原纤维较B组明显减少,围绕在增生小胆管周围,分布较均匀；D组胶原纤维较B、C组均明显减少,主要分布于增生小胆管周围,相邻小胆管间胶原纤维排列整齐。定量分析显示：胆总管结扎后,B组、C组、D组胶原纤维面积显著高于A组(P0.01)。给予不同剂量非诺贝特药物处理后,C组、D组肝细胞凋亡数目显著低于B组(P0.01),D组大鼠肝组织胶原纤维面积显著低于C组(P0.01)。结论：本次实验通过OJ动物模型建立,从生化和组织学角度初步探讨了非诺贝特在OJ肝损害发病中的作用,提示短期应用非诺贝特可明显减轻胆道梗阻肝损害,且具有一定的剂量依赖性,其机制可能与其抑制炎症反应、抑制细胞凋亡、抗肝组织纤维化等有关。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575
【图文】：

酶学,和图

结果见表2、图l和图2。各组大鼠血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBA含量的结果比较(x土s)mParisonofresultsofALT，AST，ALP，GGTandTBAinserumofrats(龙比)ALT(U/L).0士153AST(U/L)125.9士27.9ALP(U/L)115.6士23.8GGT(U/L)4.6士1.9TBA(pmol/ml)1.8士0.72.7士18.3’)371.8士39.9”588.7士53.9’)71.8士18.5”52.6士14.9士11.7”2)士15.6”艺，:‘，353.1士15.0”2)562.7士28.1”“，65.1士14.6”2，54.8士10.6298.5士20.3”2)‘，)448.7士37.4‘’2，:‘，51.0士7.6’)2):，，34.0士7.9”“，成U勺‘.86100200.3440.000401.4360.00071.6350.00072.6680.000:P<0.01，vsA组;2):P(0.01，vSB组;3):P<0.01，vsC组

含量比较,统计学意义

D组之间大鼠血清中ALT含量的差异无显著统计学意义(尸>0.01);B组、C组之间大鼠血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBA含量的差异无显著统计学意义(尸)0.01)。结果见表2、图l和图2。表2各组大鼠血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBA含量的结果比较(x土s) TabZComParisonofresultsofALT，AST，ALP， GGTandTBAinserumofrats(龙比)ALT(U/L)A组(n=12)B组(n=12)C组(n=12)D乡尺(n=12)尸值尸值57.0士 153AST(U/L)125.9士27.9ALP(U/L) 115.6士23.8GGT(U/L) 4.6士 1.9TBA(pmol/ml) 1.8士0.7132.7士18.3’)371.8士39.9”588.7士53.9’) 71.8士18.5”52.6士14.9’)士 11.7”2)士 15.6”艺，:‘，353.1士15.0”2)562.7士28.1”“，65.1士14.6”2，54.8士10.6’)2)298.5士20.3”2)‘

统计学意义,和图

组大鼠血清中TNF一a含量显著高于B组(尸<0.01)，D组大鼠血清中TNF一a含量显著低于B组(尸<0.01)，B组、C组之间和C组、D组之间大鼠血清中TNF一a含量的差异无显著统计学意义(尸>0.01)，见表3、图3和图4。表3各组大鼠血清IL一lp、TNF一Q含量的比较(x士s) Tab3ComParisonofresultsofIL一lp，TNF一 ainserumofrats(义土，)IL一lp(Pg/ml)TNF一a(ng/ml)A组 5.10士 1.021.78士0.62(n=12)B组18.86士6.32，，3.33士0.84，)(n=12)C组 9.32士3.28，，，，，2.92士0.91‘，月，(n=12)D组 5.97士 1.60‘，，2

【参考文献】