α-受体阻滞剂和β-受体阻滞剂对内皮素-1介导肝星状细胞收缩的影响
发布时间：2020-08-28 06:05
【摘要】： 目的 探讨α-AR阻滞剂和β-AR阻滞剂对ET-1介导的HSCs收缩的影响,为β-AR阻滞剂联用α-AR阻滞剂降低肝硬化门脉高压提供新的理论依据。 方法 1体外培养HSCs,Western blot检测HSCs AR蛋白的表达;免疫细胞化学法检测肾上腺素受体亚型在HSCs的分布与定位。 2应用激光共聚焦显微镜(laser confocal scanning microscope,LSCM),采用第三代钙荧光探针Fluo-3/AM观察α-AR阻滞剂(酚妥拉明)、非选择性β-AR阻滞剂(普萘洛尔)、β1-AR阻滞剂(美托洛尔)及β2-AR阻滞剂(ICI-118551)对正常HSCs以及ET(1.1×10-9 mol·L-1)介导下的HSCs[Ca2+]i荧光强度、细胞面积及最大长径变化的影响。 3计量资料数据均以均数±标准差( x±S)表示,用SPSS13.0软件进行统计分析,以P㩳0.05作为差异显著性标准。 结果 1 Western blot证实HSCs表达α-AR、β1-AR、β2-AR分别在大约57 kD、50 kD、47 kD位置出现α-AR、β1-AR、β2-AR特异性条带。 2免疫细胞化学法证实HSCs可以表达α-AR、β1-AR、β2-AR,且α-AR、β1- AR、β2-AR在HSCs中的分布基本一致,主要分布于细胞浆,细胞膜也有少量表达。 3除β1-AR阻滞剂美托洛尔外,其余各AR阻滞剂能够导致HSCs[Ca2+]i显著下降(P0.05);但各AR阻滞剂对HSCs收缩无显著影响。 4 ET-1能够引发的HSCs[Ca2+]i瞬间而短暂的升高,且出现HSCs面积及最大直径显著减小,EC50值约在1.1×10-9mol?L-1。 5除β1-AR阻滞剂美托洛尔外,其余各AR阻滞剂能够显著抑制ET-1引起的HSC内Ca2+浓度升高及收缩作用(P0.05),其中β2-AR阻滞剂(ICI11-8551)组和α+β-AR阻滞剂(酚妥拉明+普萘洛尔)阻滞剂组作用最显著。 结论 1 HSCs可以表达α-AR、β1-AR和β2-AR肾上腺素受体蛋白主要分布于HSCs的细胞浆,细胞膜也有少量表达。 2普萘洛尔、酚妥拉明、ICI-118551不仅能够引起HSC [Ca2+]i下降,还能够抑制ET-1介导的HSCs收缩,以ICI-118551及酚妥拉明+普萘洛尔联用时用更强。 3β1-AR阻滞剂美托洛尔既不能够引起HSC [Ca2+]i下降,也不能够抑制ET- 1介导的HSCs收缩。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.2
【图文】：
α-AR、β1-AR、β2-AR 在 HSCs 中的分布基本一致，主要分布于细胞浆，细胞膜也有少量表达（见图 3.A～C）。4 LSCM 检测 HSCs [Ca2+]i、面积、长度变化4.1 HSCs 的 Ca2+成像LSCM 下 Ca2+成像的 HSCs 仍可见普通倒置显微镜下的形态特征，细胞内[Ca2+]i 的浓度的高低由细胞被激发出的荧光强弱表示，荧光强度越强表示[Ca2+]i浓度越高，反之则越低。本实验 HSCs 与 Fluo-3/AM 孵育后，所有细胞均有钙离子结合后的绿色荧光表达，且各细胞间的荧光强度基本一致。(见图 4)4.2 静息状态下 HSCs[Ca2+]i 的动态变化为证明 PBS 液本身对 HSCs[Ca2+]i 的影响，本研究观察了 4 个 HSCs 在实验所需的时间内（20min）[Ca2+]i 的动态变化，结果表明，HSCs 在实验所需的整个时间内[Ca2+]i 荧光强度基本保持稳定（见图 5）
图 6 不同浓度 ET-1 对 HSCs[Ca2+]i 的累积反应曲线4.4 α、β-AR 阻滞剂对 HSCs[Ca2+]i 浓度、面积及长度的影响在 LSCM 下可观察到除 β1-AR 阻滞剂美托洛尔外，其余各 AR 阻滞剂够引起 HSCs[Ca2+]i 显著下降(P＜0.05)；但各 AR 阻滞剂对 HSCs 收缩无显响（见表 2，图 7）。表 2 α、β-AR 阻滞剂对 HSCs[Ca2+]i 浓度、面积及长度的影响( x ±S，n=组别 [Ca2+]i 浓度 面积变化（%） 长度变化空白对照组 68.64 ± 7.00 —— ——普萘洛尔组 56.88 ± 4.73a5.37 ± 0.68 5.65 ±0.8美托洛尔组 65.24 ± 6.61 5.10 ± 0.84 5.84 ± 1.ICI118551 组 55.57 ± 4.07a5.64 ± 1.13 6.14 ± 0.
Westernblot检测出的各种AR在HSCs中的表达
本文编号：2807213
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.2
【图文】：
α-AR、β1-AR、β2-AR 在 HSCs 中的分布基本一致，主要分布于细胞浆，细胞膜也有少量表达（见图 3.A～C）。4 LSCM 检测 HSCs [Ca2+]i、面积、长度变化4.1 HSCs 的 Ca2+成像LSCM 下 Ca2+成像的 HSCs 仍可见普通倒置显微镜下的形态特征，细胞内[Ca2+]i 的浓度的高低由细胞被激发出的荧光强弱表示，荧光强度越强表示[Ca2+]i浓度越高，反之则越低。本实验 HSCs 与 Fluo-3/AM 孵育后，所有细胞均有钙离子结合后的绿色荧光表达，且各细胞间的荧光强度基本一致。(见图 4)4.2 静息状态下 HSCs[Ca2+]i 的动态变化为证明 PBS 液本身对 HSCs[Ca2+]i 的影响，本研究观察了 4 个 HSCs 在实验所需的时间内（20min）[Ca2+]i 的动态变化，结果表明，HSCs 在实验所需的整个时间内[Ca2+]i 荧光强度基本保持稳定（见图 5）
图 6 不同浓度 ET-1 对 HSCs[Ca2+]i 的累积反应曲线4.4 α、β-AR 阻滞剂对 HSCs[Ca2+]i 浓度、面积及长度的影响在 LSCM 下可观察到除 β1-AR 阻滞剂美托洛尔外，其余各 AR 阻滞剂够引起 HSCs[Ca2+]i 显著下降(P＜0.05)；但各 AR 阻滞剂对 HSCs 收缩无显响（见表 2，图 7）。表 2 α、β-AR 阻滞剂对 HSCs[Ca2+]i 浓度、面积及长度的影响( x ±S，n=组别 [Ca2+]i 浓度 面积变化（%） 长度变化空白对照组 68.64 ± 7.00 —— ——普萘洛尔组 56.88 ± 4.73a5.37 ± 0.68 5.65 ±0.8美托洛尔组 65.24 ± 6.61 5.10 ± 0.84 5.84 ± 1.ICI118551 组 55.57 ± 4.07a5.64 ± 1.13 6.14 ± 0.
Westernblot检测出的各种AR在HSCs中的表达
【参考文献】
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本文编号：2807213
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