限食联合多不饱和脂肪酸对大鼠溃疡性结肠炎的影响

发布时间：2020-08-29 07:24

　　目的:运用析因设计旨在观察限食联合多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)对大鼠溃疡性结肠炎的影响,并初步阐释其对大鼠PPARγ/NF-κB信号通路的影响。方法:选取40只健康SD雌性大鼠,随机分为5组:正常组、模型组、限食组(CR)、5:1PUFAs自由进食组(5:1PUFAs+AL)、5:1PUFAs限食组(5:1PUFAs+CR)。正常组、限食组和模型组的大鼠提供普通饲料;5:1PUFAs限食组和5:1PUFAs自由进食组的大鼠提供5:1PUFAs配制饲料,限食大鼠的喂食量占自由进食的60%。喂养14周后,除正常组外,其余四组均给予5%DSS溶液自由饮用1周制备大鼠溃疡性结肠炎模型。所有大鼠3天后处死,剥离出结肠测量其长度并称重及计算湿重指数;观察大体形态并进行评分;并用生化法检测结肠组织和血清髓过氧化物酶(MPO)活性;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测结肠组织中IL-6、IL-2、IL-10和TNF-α水平;用免疫组化法来检测结肠组织中PPARγ、NF-κB p65蛋白的表达情况;用逆转录反应(RT-PCR)法检测结肠组织中NF-κB p65、PPARγm RNA水平。结果:1.一般状况:与自由进食的大鼠相比,限食的大鼠体重增长速度缓慢,尤其是5:1PUFAs限食组体重最轻,差别有统计学意义(P0.05)。2.肉眼大体形态评分:模型组可见粘膜充血肿胀,结肠表面有糜烂、出血点及溃疡,其大体形态评分明显增加,5:1PUFAs限食组上述特征明显缓解,大体评分降低(P0.05)。3.疾病活动指数(DAI)评分:与正常组比较,模型组DAI评分较高,差别有统计学意义(P0.05);与模型组相比,5:1PUFAs限食组评分降低,差别有统计学意义(P0.05)。4.结肠长度、重量及湿重指数:与正常组相比,模型组结肠长度明显缩短,结肠重量显著升高(P0.05)。与模型组相比,5:1PUFAs限食组结肠长度增长,而结肠重量及湿重指数下降(P0.05)。5.结肠组织病理学评分:结果显示正常组结肠黏膜上皮完好,上皮细胞排列整齐,腺体规则,无炎性细胞浸润,且无充血、水肿和溃疡的形成;模型组结肠黏膜上皮脱落,腺体排列错乱,弥漫性炎性细胞浸润;与模型组相比,5:1PUFAs限食组炎症有所改善,差别有统计学意义(P0.05)。限食与5:1PUFAs的联合作用对结肠组织病理学评分无交互作用(P0.05)。6.血清和组织MPO活性:模型组血清和结肠组织中MPO活性最高,而5:1PUFAs限食组血清和结肠中MPO活性下降,差别有统计学意义(P0.05)。限食与5:1PUFAs的联合作用对血清和组织MPO活性无交互作用(P0.05)。7.细胞因子的检测:相对于正常组,模型组大鼠结肠组织的TNF-α、IL-6水平升高,IL-2、IL-10水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,5:1PUFAs限食组IL-6、TNF-α水平降低,IL-2、IL-10水平升高(P0.05)。限食与5:1PUFAs的联合作用对细胞因子有交互作用(P0.05)。8.免疫组化的结果:与正常组相比,模型组大鼠结肠组织PPARγ表达降低,NF-κB p65蛋白的表达水平升高,差别有统计学意义(P0.05);与模型组相比,5:1PUFAs限食组大鼠结肠组织PPARγ表达升高,NF-κB p65蛋白的表达水平降低,差别有统计学意义(P0.05)。限食与5:1PUFAs的联合作用对结肠组织蛋白表达NF-κB p65和PPARγ存在交互作用(P0.05)。9.RT-PCR反应的结果:与正常组相比,模型组大鼠结肠组织NF-κB p65 m RNA的表达水平升高,PPARγm RNA表达降低,差异有统计学意义(P0.05);与模型组相比,5:1PUFAs限食组大鼠结肠组织NF-κB p65 m RNA表达水平降低,PPARγm RNA显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。限食与5:1PUFAs的联合作用对结肠组织PPARγ和NF-κB p65 m RNA表达存在交互作用(P0.05)。结论:1.葡聚糖硫酸钠(DSS)是一种人工合成的类肝素硫酸多糖,用5%DSS溶液代替自来水饮用1周成功建立大鼠溃疡性结肠炎模型。2.限食联合5:1PUFAs对UC大鼠有保护作用,可能的作用机理是与抗氧化损伤和减轻炎症作用有关,上调PPARγ的表达而负性调节NF-κB的转导,抑制炎症细胞募集,从而减少炎症因子的表达,减缓炎症反应,对UC起保护作用。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R574.62;R459.3
【部分图文】：

气相色谱分析,脂肪酸,红花籽油,亚麻籽油

1.1.5 干预物及饲料亚麻籽油主要成分及含量(%)为：α-亚麻酸 52%，油酸 20.44%，棕榈酸 5.67%，硬脂酸 3.72%。红花籽油主要成分及含量(%)为：亚油酸 81.3%，油酸 11.2%，棕榈酸 5.32%，硬脂酸 1.90%。普通饲料来源于山西医科大学实验动物中心。5:1 PUFAs配制饲料是在普通饲料的基础上，添加总量n-6/n-3PUFAs=5%的亚麻籽油和红花籽油，例如100g饲料是由95g基础饲料添加总量为5g n-6/n-3=5:1的亚麻籽油和红花籽油。气相色谱法分析5:1 PUFAs配制饲料中脂肪酸的含量，其主要组分及含量(%)为：亚油酸4.92%、亚麻酸0.92%、棕榈酸0.21%、硬脂酸0.064%、油酸0.69%(见图1-1)。

大鼠,体重,体重比,自然生长

由进食组大鼠体重增长符合动物自然生长规律，限食组大鼠体重增长速验前各组大鼠最初体重差别没有统计学意义(P>0.05)。实验结束后，与比，限食大鼠体重减轻(见表 2-1)，尤其是 5:1PUFAs 限食组体重最轻学意义(P<0.05)，解剖时观察到限食大鼠腹腔内脂肪比自由进食大鼠少表 2-1 各组大鼠最初、最终体重比较( x ±s，n=8)a表示限食大鼠与非限食大鼠相比较，P<0.05分组最初体重/g 最终体重/g正常组 203.76±13.87 356.21±29.76模型组 199.14±11.44 348.83±30.85CR 组 198.44±19.34 261.04±27.44a5:1PUFAs+AL 组 199.53±19.16 328.31±29.235:1PUFAs+CR 组 198.18±16.45 237.49±16.65a

变化情况图,大鼠,变化情况,血便

大鼠出现血便；而两个限食组大鼠较模型组精神状态好，毛色稍黯淡，活黏液稀便的情况有所好转，其中 5:1PUFAs 限食组大鼠症状最轻。结果可 DAI 评分高于正常组，5:1PUFAs 限食组 DAI 评分低于模型组，差别有统<0.05)(见表 2-2，图 2-2)。

【参考文献】