人脐带间充质干细胞治疗大鼠肝硬化的实验研究

发布时间：2017-04-01 18:11

  本文关键词：人脐带间充质干细胞治疗大鼠肝硬化的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：摘要：目的：研究人脐带间充质干细胞(UC-MSC)和骨髓间充质干细胞(BM-MSC)的基因表达差异和免疫调控能力,然后采用人脐带间充质细胞治疗肝硬化大鼠,研究肝脏在治疗前后基因表达的变化；最后研究肝细胞表达的NAT8酶在脐带间充质干细胞治疗肝硬化过程中的作用。方法：首先从人脐带的血管外下层分离培养UC-MSC,然后从人骨髓样本中分离培养BM-MSC,进行细胞形态学观察、生长观察,以及流式细胞术鉴定其细胞表型,检测这两种细胞向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞的分化能力,并利用基因芯片检测了这2种细胞的基因表达差异。其次利用皮下注射四氯化碳方法建立大鼠肝硬化动物模型,将人UC-MSC通过尾静脉注射途径对肝硬化大鼠模型进行治疗,利用血清学生化指标检测和组织学胶原纤维染色证明UC-MSC的治疗效果,最后提取造模前后和治疗前后的肝脏RNA,进行表达谱芯片杂交并对芯片结果数据进行统计分析。对筛选出的NAT8酶进行了PCR验证、WB验证和功能分析,通过脂质体转染NAT8真核表达质粒和小分子干扰RNA的方法,在L02肝细胞株中上调和下调NAT8的表达,检测其对双氧水造成的肝细胞凋亡的逆转作用。结果：细胞表型检测和诱导分化实验证明,我们从骨髓和脐带中培养得到的贴壁细胞表型符合间充质细胞特征,这些细胞均能够表达例如CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD106和CD166等特征表面分子,同时不表达造血和内皮细胞标志如CD14、CD31、CD34和CD45分子。在合适的体外诱导条件下,在体外培养中向造骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化,在UC-MSC中上调的表达基因主要涉及器官的生长发育和细胞分化,而BM-MSCs中上调表达的基因主要包括骨骼发育和免疫调控。然后我们利用血清学检测和组织病理学染色结果证明,我们利用四氯化碳法成功建立了大鼠肝硬化模型,且UC-MSC治疗可以显著地改善肝损伤。芯片分析结果显示与对照组相比,UC-MSC治疗上调了补体凝血相关基因,下调细胞增殖、细胞周期和胶原合成等相关基因。其中NAT8酶在MSC介导的肝细胞抗损伤修复中发挥重要作用。在体外培养的肝细胞株L02实验中,MSC条件上清可显著改善双氧水引起的细胞凋亡,上调NAT8酶可以减少双氧水引起的细胞凋亡,而下调NAT8酶则加剧了细胞凋亡。结论：UC-MSC增殖快,表达更多的生长发育相关基因,更适合于用于异体间细胞输注治疗,在UC-MSC治疗肝硬化大鼠逆转肝细胞损伤的过程中,可能通过上调了补体凝血相关基因,抑制细胞增殖和胶原沉着发挥治疗作用。其中NAT8酶在MSC介导的肝细胞抗损伤修复中发挥重要作用。
【关键词】：脐带间充质细胞 肝硬化 基因芯片 细胞分化
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符号说明10-11
• 第一部分 人骨髓与脐带衍生的间充质干细胞的基因表达谱比较11-20
• 材料与方法12-16
• 结果16-18
• 讨论18-20
• 第二部分 人脐带间充质干细胞治疗肝硬化大鼠的研究20-30
• 材料与方法21-24
• 结果24-27
• 讨论27-30
• 第三部分 NAT8酶在脐带间充质干细胞治疗损伤肝细胞中的作用30-38
• 材料方法31-35
• 结果35-36
• 讨论36-38
• 附图表38-54
• 参考文献54-63
• 致谢63-64
• 在读期间发表的论文64-65
• 发表论文65-73
• 附件73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 赵振强;陈志斌;蔡美华;王淑荣;陈蓉;王W，

本文编号：281064