PDX-1促进大鼠胰腺导管上皮细胞向胰岛细胞分化的体外实验研究

发布时间：2020-09-05 14:06

　　 第一部分胰腺导管上皮细胞的原代、传代培养和转染 目的完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养,成功转染PDX-1基因进入胰腺导管上皮细胞。 方法用含有胶原酶V型的消化液对大鼠胰腺组织进行消化分离,接着用梯度离心法将导管上皮细胞分离纯化,在体外经RPMI1640及含10%胎牛血清(FBS)的培养液培养,在达到80%～90%的细胞汇合时,1∶2传代培养。传代3～5次后接种于6孔板中转染重组载体PDX-1(XlHbox8VP16),分转染组与非转染组。 结果获得的原代培养细胞有上皮细胞的生长排列方式,可初步认定为胰腺导管上皮细胞。原代培养的胰腺导管上皮细胞可传代培养到第3～5代不等。 结论我们的原代培养和传代培养的方法能在体外培养出较纯的胰腺导管上皮细胞,并能进行成功转染PDX-1。 第二部分体外转染PDX-1在胰腺导管上皮细胞分化中的作用及衍生胰岛细胞功能鉴定 目的体外观察转染PDX-1对胰腺导管上皮细胞分化为胰岛细胞的作用。 方法对转染组与非转染组细胞进行培养,取各时间点细胞进行实验,实时定量RT-PCR检测细胞中PDX-1,胰岛素mRNA的表达。Western blotting检测细胞中PDX-1,胰岛素蛋白的表达。放射免疫法测定衍生胰岛细胞的分泌功能,双硫腙染色检测胰岛细胞。 结果转染组与非转染组相比,转染的细胞中有XlHbox8 mRNA的表达,且PDX-1,胰岛素mRNA以及蛋白的表达也增加。生成的胰岛细胞数量及胰岛素分泌量明显增加(葡萄糖浓度5.6 mmol/L时胰岛素分泌量1.32±0.43 vs 3.48±0.81,葡萄糖浓度16.7 mmol/L时胰岛素分泌量4.86±1.15 vs 10.25±1.32),差异有显著性(P0.01)。 结论PDX-1能显著促进胰腺导管上皮细胞分化为胰岛细胞。用此法获得大量的胰岛可能为糖尿病治疗提供一条新的途径。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2008
【中图分类】：R576
【部分图文】：

图 1.1 取材(A 左右肝管汇合处血管钳结扎；B 注入消化液的胰腺)图 1.2 胰腺导管上皮细胞体外培养（A 培养第一周；B 传代培养一周 40×10）

胰腺导管上皮细胞体外培养（A培养第一周；B传代培养一周40×10）

图 1.1 取材(A 左右肝管汇合处血管钳结扎；B 注入消化液的胰腺)图 1.2 胰腺导管上皮细胞体外培养（A 培养第一周；B 传代培养一周 40×10）

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 刘涛,范骥,王春友;转录因子PDX-1在猪胰干细胞体外诱导分化过程中的表达及意义[J];胰腺病学;2003年01期

2 ;Differentiation of rat marrow mesenchymal stem cells into pancreatic islet beta-cells[J];World Journal of Gastroenterology;2004年20期

本文编号：2813110