肝PC对张氏肝细胞酒精损伤的保护作用与Caveolin-1的关系
发布时间:2020-09-11 17:04
众所周知,磷脂是构成生物膜的主要成分,摄取磷脂酰胆碱(PC)可改善膜磷脂组分,增加膜流动性和膜酶活性,提高细胞的抗氧化能力。Caveolin-1 (窖蛋白-1, Cav-1)是膜脂筏Caveolae(胞膜窖)的标记蛋白。近年发现,磷脂能够促进Caveolin-1小泡的形成及转运,对Caveolae结构的形成和稳定及细胞膜组装具有重要作用。本室前期工作表明,肝脏磷脂酰胆碱(肝PC)含有丰富的烯醚键,能够抵抗脂质过氧化,对小鼠急性酒精肝损伤具有明显的保护作用;同时发现,肝PC能够促进小鼠肝脏中Cav-1蛋白表达,但作用机制尚不完全清楚。 本文以张氏肝细胞为对象,利用siRNA技术筛选出稳定传代的Cav-1低表达细胞株(Cav-1KD),建立酒精性肝细胞损伤模型;利用MTT、电导法和薄板层析(TLC)等技术检测酒精损伤的Cav-1KD细胞膜特性及磷脂成份变化的影响;利用Western blot技术确定肝PC预保护的酒精肝损伤细胞中氧化应激途径相关蛋白表达的变化,进一步探讨肝PC对肝细胞酒精性损伤的保护作用与Cav-1的关系,旨在了解由Cav-1蛋白在肝脏损伤修复中的作用和信号转导机制。 结果如下: 1.酒精作用导致细胞中超氧化物歧化酶(SOD)水平明显降低(P0.05),并促进氧化应激通路中TLR4、TNF-α、NF-κB表达增高及p38磷酸化激活,引发张氏肝细胞氧化应激。肝PC显著提高张氏肝细胞SOD活性(P0.05),降低TLR4、TNF-α、NF-κB、P-p38等蛋白表达水平,对肝细胞起保护作用。 2.利用RNA干扰技术建立张氏肝细胞模型,发现200mmol/L酒精引起Cav-1低表达细胞ALT释放增加(P0.05),细胞电导率显著增高(P0.01),膜PC、PE、SM等含量均降低。提示,Cav-1表达下调导致张氏肝细胞对酒精作用的敏感性明显增高。 3.肝PC预保护可以明显提高酒精损伤的Cav-1KD细胞存活率,促进Cav-1及PKCα蛋白表达。 结论:肝PC对张氏肝细胞酒精性损伤的保护作用与Cav-1密切相关。Cav-1表达下调导致张氏肝细胞对酒精作用的敏感性增高。肝PC可以通过改变膜磷脂成分,促进Cav-1介导的PKCα信号通路的激活,提高肝细胞膜的抗氧化能力,对抗酒精性损伤。
【学位单位】:辽宁师范大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2010
【中图分类】:R575
【部分图文】:
的重要酶类之一。在酒精诱导的氧化应激中 SOD 作为清酒精损伤中发挥着重要作用。实验室前期工作可见,肝精诱导时小鼠肝脏中 SOD 活性而对肝脏具有明显的保护验中,以 75nmol/L 肝 PC 预保护 24h,加入 200mmol/L肝细胞内 SOD 水平。结果如图 2.2,与对照组比较,酒精低(P<0.05);经肝 PC 预保护可明显升高细胞中 SOD 水作用。
图 2.3 肝 PC 预保护及酒精损伤肝细胞 TLR4 蛋白表达The expression of TLR4 in Chang liver cells (CHL) incubated withpresented as the mean±S.D.*P<0.05 vs. Control, #P<0.05 vsPC 预保护对酒精损伤的肝细胞中 TNF-α蛋白表达的影死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是参与酒精性精作用张氏肝细胞使 TNF-α 蛋白表达升高(P<0.05),引保护可降低 TNF-α 蛋白表达(P<0.05)。提示,酒精代子,引起肝细胞炎症反应。而肝 PC 则可显著抑制肝
图 2.3 肝 PC 预保护及酒精损伤肝细胞 TLR4 蛋白表达 expression of TLR4 in Chang liver cells (CHL) incubated with Ppresented as the mean±S.D.*P<0.05 vs. Control, #P<0.05 vs. A预保护对酒精损伤的肝细胞中 TNF-α蛋白表达的影响因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是参与酒精性肝作用张氏肝细胞使 TNF-α 蛋白表达升高(P<0.05),引护可降低 TNF-α 蛋白表达(P<0.05)。提示,酒精代谢,引起肝细胞炎症反应。而肝 PC 则可显著抑制肝细
【学位单位】:辽宁师范大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2010
【中图分类】:R575
【部分图文】:
的重要酶类之一。在酒精诱导的氧化应激中 SOD 作为清酒精损伤中发挥着重要作用。实验室前期工作可见,肝精诱导时小鼠肝脏中 SOD 活性而对肝脏具有明显的保护验中,以 75nmol/L 肝 PC 预保护 24h,加入 200mmol/L肝细胞内 SOD 水平。结果如图 2.2,与对照组比较,酒精低(P<0.05);经肝 PC 预保护可明显升高细胞中 SOD 水作用。
图 2.3 肝 PC 预保护及酒精损伤肝细胞 TLR4 蛋白表达The expression of TLR4 in Chang liver cells (CHL) incubated withpresented as the mean±S.D.*P<0.05 vs. Control, #P<0.05 vsPC 预保护对酒精损伤的肝细胞中 TNF-α蛋白表达的影死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是参与酒精性精作用张氏肝细胞使 TNF-α 蛋白表达升高(P<0.05),引保护可降低 TNF-α 蛋白表达(P<0.05)。提示,酒精代子,引起肝细胞炎症反应。而肝 PC 则可显著抑制肝
图 2.3 肝 PC 预保护及酒精损伤肝细胞 TLR4 蛋白表达 expression of TLR4 in Chang liver cells (CHL) incubated with Ppresented as the mean±S.D.*P<0.05 vs. Control, #P<0.05 vs. A预保护对酒精损伤的肝细胞中 TNF-α蛋白表达的影响因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是参与酒精性肝作用张氏肝细胞使 TNF-α 蛋白表达升高(P<0.05),引护可降低 TNF-α 蛋白表达(P<0.05)。提示,酒精代谢,引起肝细胞炎症反应。而肝 PC 则可显著抑制肝细
【参考文献】
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1 王亮;刘翠平;贾丹;邹伟;;肝源性磷脂酰胆碱的分离纯化及其对肝癌细胞抑制作用的评价[J];色谱;2006年03期
2 贾丹;刘翠平;邹伟;;缩醛磷脂的功能及信号传导机制研究进展[J];天然产物研究与开发;2007年03期
3 王泰龄;酒精性肝病的病理和分类[J];胃肠病学;2003年05期
4 潘玮敏,杨建昌;不同负荷训练对大鼠骨骼肌细胞膜自由基代谢、膜流动性及Na~+-K~+-ATP酶活性的影响[J];西安体育学院学报;2004年03期
5 于U
本文编号:2816939
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