类胰蛋白酶对大鼠肝星状细胞影响的实验研究

发布时间：2020-09-22 13:49

　　 目的:分离大鼠肝星状细胞(HSC)并进行体外培养,研究类胰蛋白酶对HSC的影响,探讨类胰蛋白酶在肝纤维化中的作用及机制。 方法:采用percoll密度梯度离心法分离大鼠HSC,经细胞形态学、免疫细胞化学和荧光显微镜鉴定后,加入不同浓度的类胰蛋白酶将HSC分为四组,即:①0ng/ml类胰蛋白酶组;②1ng/ml类胰蛋白酶组;③10ng/ml类胰蛋白酶组;④100ng/ml类胰蛋白酶组,36h后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HSC的增殖,用半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测I型胶原、蛋白水解酶激活受体-2(PAR-2)及内源性过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ(PPAR-γ)mRNA的表达。 结果: 1、新分离的细胞在荧光显微镜328 nm波长的紫外光激发下,可观察到蓝绿色的自发荧光;免疫细胞化学染色显示所培养的细胞Desmin蛋白阳性,证实所培养的细胞是HSC; 2、类胰蛋白酶在(1～100)ng/ml范围内,以剂量依赖方式促进HSC增殖(P0.05),最高达对照组的1.64倍。 3、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml类胰蛋白酶均可使培养的HSC I型胶原、PAR-2 mRNA的表达增强,使PPAR-γmRNA的表达抑制,此作用呈剂量依赖性(P0.05),分别达对照组的1.29、1.32、1.47倍。 结论:类胰蛋白酶可以刺激HSC增殖,并促进PAR-2和I型胶原mRNA的高表达及PPAR-γmRNA的低表达,提示类胰蛋白酶是重要的致纤维化因子,可能通过HSC上的PAR-2受体发挥作用,参与了慢性肝病时肝纤维化的形成和发展。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2008
【中图分类】：R575.2

【参考文献】

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本文编号：2824476