脐血干细胞与骨髓干细胞联合移植治疗肝衰竭的实验研究

发布时间：2020-09-22 16:53

　　背景及目的：我国急性肝功能衰竭发生率高,其病理特点是大块或亚大块肝细胞坏死,而残存肝细胞的增殖受到各种因素的抑制难以再生。原位肝移植是治疗终末期肝病的有效方法,但因供肝不足,价格昂贵,而且需要终身服用免疫抑制剂等诸多因素限制了其临床应用。干细胞移植作为辅助治疗方法是肝移植的重要补充。目前已经有大量实验研究证实干细胞在一定的条件下能够向肝细胞定向分化。本文主要观察脐血干细胞和自体骨髓干细胞共同移植治疗D-gal所致大鼠急性肝衰竭疗效,为临床干细胞共移植治疗肝衰竭提供实验依据。方法： 1.采集,培养干细胞：采集大鼠脐血和骨髓后,在培养体系中加入特定的细胞因子：促肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF),干细胞因子(Stem cell factor,SCF),观察细胞生长情况,培养21天后对细胞进行检测,采用免疫细胞化学检测培养后的细胞是否表达肝细胞特征产物白蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)。 2.动物实验：D-gal 1.4g/kg腹腔注射建立大鼠急性肝衰竭模型。将建模后24小时存活的大鼠随机分成4组。每日(总共7天)分别经鼠尾静脉注入单独的脐血干细胞或骨髓干细胞以及混合后的脐血干细胞及骨髓干细胞或生理盐水0.8ml。观察4组大鼠存活率,肝功能及肝组织病理变化程度。结果： 1.在SCF,HGF的诱导下,脐血干细胞和骨髓干细胞可以在体外扩增并分化为肝细胞。 2.1.4g/kg D-gal所致肝衰竭鼠3天病死率达80%,组织学见大面积肝坏死,血清转氨酶,胆红素明显升高。而干细胞治疗组72小时存活率明显升高,肝组织病变明显减轻,血清转氨酶,胆红素明显降低。 3.脐血干细胞和骨髓干细胞共同移植治疗组存活率(77%)高于脐血干细胞治疗组(57%)和骨髓干细胞治疗组(50%),统计学比较,肝功能及组织学改善也优于脐血干细胞治疗组和骨髓干细胞治疗组。结论： 1.在SCF,HGF的诱导下,脐血干细胞和骨髓干细胞可以在体外扩增并分化为肝细胞。 2.1.4g/kg D-gal可造成大鼠肝组织弥漫性损伤,不经治疗死亡率达80%以上。 3.尾静脉分别注射骨髓干细胞,脐血干细胞,骨髓干细胞和脐血干细胞对D-gal致大鼠肝损伤均有一定的治疗作用。 4.在肝功能和肝组织病理改变方面,骨髓干细胞和脐血干细胞联合治疗组优于单用骨髓干细胞治疗组和脐血干细胞治疗组。
【学位单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R575.3
【部分图文】：

脐血干细胞,骨髓干细胞

2.脐血单个核细胞的传代培养消化传代后的细胞形态除梭形细胞外，还可见圆形，类圆形，及多边形细胞呈类肝细胞形态。见图1一2。图1一消化传代后的脐血干细胞3.骨髓干细胞的原代培养种瓶后的细胞培养72小时后更换培养液，去除未贴壁细胞，此时贴壁生长的骨髓干细胞数量稀少，散在存在，多呈细而小梭形。(图1一3)2周左右细胞达80%融合，其形态呈均一的长梭形。传代培养后的骨髓干细胞未见明显的形态改变。

脐血干细胞,骨髓干细胞

尹又拭越从溉二嫩辱护图1一1分离7天后的脐血干细胞2.脐血单个核细胞的传代培养消化传代后的细胞形态除梭形细胞外，还可见圆形，类圆形，及多边形细胞呈类肝细胞形态。见图1一2。图1一消化传代后的脐血干细胞3.骨髓干细胞的原代培养种瓶后的细胞培养72小时后更换培养液，去除未贴壁细胞，此时贴壁生长的骨髓干细胞数量稀少，散在存在，多呈细而小梭形。(图1一3)2周左右细胞达80%融合，其形态呈均一的长梭形。传代培养后的骨髓干细胞未见明显的形态改变。

干细胞,骨髓干细胞,脐血干细胞,传代培养

【参考文献】