基于心胃相关理论组方中药对IBS模型大鼠脑肠轴CRH及肥大细胞的干预作用

发布时间：2020-09-26 16:52

　　肠易激综合征(IBS)是一种常见的以腹痛／腹部不适伴排便习惯改变为特征的功能性肠病,缺乏形态学和生化学改变的生物学标志。IBS的发病机制迄今仍不明确,现在普遍认为是多种因素综合作用的结果,其中心理、精神、社会和环境等因素在发病过程中起重要作用,同时受神经系统、免疫系统和内分泌系统的制约,导致肠道平滑肌运动障碍和内脏感觉异常。在此基础上,当机体受到某些诱因刺激时就会引起肠道易激和过激的功能反应,导致一系列临床症状。其症状发生的直接机制是基于肠道高敏感性和高反应性基础上的肠道运动功能异常。本文通过文献回顾了IBS的发病、致病机理、诊断治疗及肾上腺皮质激素释放因子(Corticotropin-releasing hormone, CRH)通路和肥大细胞在IBS致病作用的研究。目的本课题旨在通过IBS大鼠模型实验研究,探讨肠易激综合征的发生是否与肾上腺皮质激素释放因子(Corticotropin-releasing hormone, CRH)通路和肥大细胞相关。从而加深我们对肠易激综合征的发病机制的认识,并有助于解释中药康泰复方治疗肠易激综合征的作用途径及机制,为心胃相关理论治疗肠易激综合征的现代化生物学基础提供科学根据及理论支持。方法将育龄7天的新生SD大鼠共110只随机分出正常对照组10只,其中100只利用幼鼠母子分离加直肠刺激法复制大鼠IBS内脏高敏感性模型,造模成功后按体重随机分出模型组、中药高、中、低剂量组,和西药马来酸曲美布汀对照组各20只。给药两周后运用放射免疫法检测大鼠模型下丘脑、脑干CRH水平,免疫组化法检测IBS内脏高敏感性大鼠肠粘膜肥大细胞数目、活化状态(c-fos基因表达情况)及中药康泰复方对其影响；并与模型组及马来酸曲美布汀组进行比较。结果 1正常大鼠与造模大鼠不同时期体重变化用幼鼠母子分离加直肠刺激法复制内脏高敏感性IBS大鼠与正常对照组大鼠体重变化无显著性差异(P0.05),说明本法造模不会影响大鼠的正常状态。2大鼠在清醒状态下,逐渐加压扩张肠道,观察大鼠腹部抬起与背部拱起的血压计的压力平均值,采用幼鼠母子分离加直肠刺激法复制内脏高敏感性IBS大鼠模型,在大鼠出生后第六周其内脏高敏感性显著升高(P0.05),说明造模成功。 3、IBS内脏高敏感性大鼠经康泰胶囊治疗2周后,用药组大鼠内脏高敏感性明显降低(P0.05),且中、高剂量治疗组已恢复到接近正常水平(P0.05)。提示康泰胶囊对IBS模型大鼠内脏高敏感性有改善作用。 4、康泰胶囊治疗后,用幼鼠母子分离加直肠刺激法复制内脏高敏感性IBS大鼠与正常对照组大鼠体重、活动、毛发光泽无显著性差异(P0.05),说明康泰胶囊是安全的,不存在明显的副作用。 5、与正常组相比,模型组大鼠下丘脑CRH含量明显升高,两组间比较P0.05,差异具有统计学意义。 6、与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组大鼠下丘脑CRH水平均有所降低。其中,西药组、中药康泰复方高、中剂量组与模型组相比P0.05,差异均有统计学意义；中药低剂量组与模型组相比虽无统计学差异,但仍存在下降的趋势。 7、与正常组相比,模型组大鼠脑干CRH含量明显升高,两组间比较P0.05,差异具有统计学意义。 8、与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组大鼠脑干CRH水平均有所降低。其中,西药组、中药康泰复方高、中剂量组与模型组相比P0.05,差异均有统计学意义；中药低剂量组与模型组相比虽无统计学差异,但仍存在下降的趋势。 9、光镜下观察c-Fos表达染色呈棕黄色,与正常组相比,模型组大鼠结肠远端肥大细胞c-fos表达水平明显升高,两组间比较P0.05,差异具有统计学意义。 10、与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组大鼠结肠远端肥大细胞c-fos基因表达水平均有所降低。其中,西药组、中药康泰复方高、中、低剂量组与模型组相比P0.05,差异均有统计学意义；并且,中药中药康泰复方用药剂量与鼠结肠远端肥大细胞c-fos基因表达水平呈负相关。结论 1.D-IBS大鼠脑干、下丘脑CRH含量表达的升高提示其表达改变与D-IBS的发病相关。 2.中药康泰复方是治疗IBS-D安全有效的方剂。 3.基于心胃相关理论组方的中药康泰复方能降低IBS-D高敏性大鼠脑干、下丘脑CRH含量,其作用机制可能是与影响脑肠轴CRH通路有关。 4、用科学的研究方法的出实验结果证实了周福生教授提出的“心胃相关理论”的正确性。
【学位单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R574
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
目录
引言
第一章文献综述
    第一节国内外研究现状
        一、流行病学研究
        二、病因学研究
            1. 精神心理因素
            2. 胃肠动力学障碍
            3. 肠道感染
            4. 免疫学机制
            5. 内脏高敏感性
            6. 其他因素
        三、诊断肠易激综合征的辅助检查
        四、肠易激综合征的诊断标准与分型
            1 国际标准
            2 国内标准
        五、中医学对IBS的辩证诊断及治疗
            1 中医病因
            2 中医病机
        六、IBS的中医治疗
        七、IBS的现代医学治疗
            1、IBS的一线治疗方案
            2、IBS的二线治疗方案
            3、IBS的三线治疗方案
    第二节脑肠轴CRH在IBS发病中的作用
        一、脑-肠互动与IBS
        二、CRH通路与IBS
            1 CRH对胃肠运动功能的直接影响
            2. CRH与情志因素的相互关联
    第三节肠易激综合征与肥大细胞
        一、肥大细胞的功能
        二、肥大细胞与IBS相关的证据
        三、肥大细胞和内脏感觉过敏
        四、肥大细胞与肠动力异常
        五、肥大细胞在IBS免疫机制中的作用
        六、结语
    第四节 IBS动物模型研究
        一、IBS动物模型的制备
            1 感染、炎症导致的IBS动物模型
            2 结肠和直肠刺激导致的IBS动物模型
            3 应激引起的IBS动物模型
            4 神经-内分泌因素导致的IBS动物模型
            5 早期生活事件导致IBS动物模型
            6 冰水灌胃致便秘型IBS的动物模型
        二、IBS动物模型制备研究进展
            1 食物及药物过敏导致的IBS动物模型
            2 细菌潜生体相关的IBS动物模型
    第五节心胃相关理论内涵与外延
        一、心胃相关的涵义
        二、心胃相关的现代物质基础研究
        三、安神和胃法的内涵探讨
        四、心胃相关与脏腑相关
        五、情志与五脏相关的探讨
    第六节回顾与评价
第二章研究方法和材料
    第一节造模方法及评估
        一、造模方法
        二、实验材料
        三、给药方法及分组
        四、腹部回缩反射(AWR)的压力阈值检测
    第二节检测项目及方法
        一、样本的收集与处理
        二、射免疫测定方法(radioimmunoassy,RIA)检测IBS内脏高敏感性大鼠下丘脑及脑干CRH水平及中药康泰复方对其影响
        三、c-Fos的免疫组化法检测IBS内脏高敏感性大鼠肠粘膜肥大细胞数目、活化状态(c-fos基因表达情况)及中药康泰复方对其影响
第三章实验结果及分析
    第一节大鼠一般情况变化
    第二节判断造模成功与否
    第三节基于心胃相关理论中药组方康泰胶囊治疗IBS大鼠前后比较
        一、康泰胶囊治疗后IBS大鼠内脏高敏感性差异
        二、康泰胶囊治疗后内脏高敏感性IBS大鼠体重变化
        三、各组大鼠下丘脑CRH水平变化及中药康泰复方对其影响
        四、各组大鼠脑干CRH水平变化及中药康泰复方对其影响
        五、各组大鼠远端肠粘膜肥大细胞中C-fos活化状态
第四章实验结论及探讨
    第一节内脏高敏感动物模型的建立及评价
    第二节各组大鼠下丘脑及血浆脑干中CRH含量的变化及其意义
        一、CRH对胃肠运动功能的直接影响
        二、情绪改变和心理应激与IBS
        三、肥大细胞与IBS
    第四节心胃相关理论对临床的指导意义
        一、在肠易激综合征(IBS)辨治中的运用
        二、跟师过程中心胃相关理论指导临床辩证论治经典病案
        三、小结
    第五节不足与展望
        一、正确地评估动物疾病模型
        二、平衡中医辩证论治多样性与实验可重复性
        三、创新与展望
参考文献
研究生在学期间发表论文情况
致谢

【引证文献】