阿德福韦酯治疗前后乙型肝炎病毒耐药变异情况及与基因型相关性的研究

发布时间：2020-09-28 20:25

　　目的：观察乙型肝炎病毒(HBV)不同基因型对阿德福韦酯(ADV)治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者疗效的影响；并观察rtA181V／T／rtN236T是否存在自然变异以及ADV诱发变异情况,并分析变异与HBV基因型的关系。方法：1.随机选取符合HBVDNA≥105IU/ml(HBeAg阴性者为≥104IU／ml)；ALT≥2×ULN；首次应用口服抗病毒药物治疗的CHB患者,并排除合并其它肝炎病毒感染、肝癌、自身免疫性疾病、糖尿病、肾功能异常及近半年内使用过免疫抑制剂者以及妊娠或哺乳期妇女,共入选CHB患者86例。所有入选患者口服ADV10mg／d,疗程48周。2.ADV治疗前、治疗48周,分别采集患者空腹静脉血,离心后抽取血清置于-80℃冰箱备用。3.提取血清中HBVDNA,根据HBVDNA Pre-S和S基因区保守序列设计引物经巢式PCR (ntPCR)扩增,琼脂糖凝胶电泳根据碱基对(bp)大小判断A-F6种HBV基因型。4.ADV治疗前、治疗后12、24、48周分别采用荧光定量PCR法检测HBVDNA定量、全自动生化仪检测ALT水平以及ELISA法检测血清病毒学标志物；观察HBV不同基因型对ADV治疗CHB患者疗效的影响。5.治疗结束后,选取全部治疗有效但HBVDNA未转阴的患者以及无效和出现病毒学突破的患者,对治疗前、治疗48周留取的血清标本提取HBVDNA,采用ntPCR扩增HBV逆转录酶(RT)区序列,用直接测序法观察是否存在rtA181V／T／rtN236T变异,如有变异存在,并分析变异与基因型的关系。结果：86例CHB患者中,26例(30.23%)为B基因型；54例(62.79%)为C基因型；6例(6.98%)为B+C型；治疗前B、C基因型CHB患者HBVDNA、ALT水平以及HBeAg/HBeAb无统计学差异(p0.05),治疗后12、24、48周HBVDNA有效抑制率、转阴率、ALT复常率、HBeAg转阴率、HBeAg/HBeAb转换率无明显差异(p0.05),进一步证明B、C基因型与ADV疗效无显著性差异。86例CHB患者治疗48周后,其中有效72例,包括27例患者HBVDNA未转阴,45例患者HBVDNA转阴、9例无效,1例发生病毒学突破,所选取的CHB患者治疗前及治疗48周的血清标本,进行PCR-DNA直接测序,结果显示均未出现rtA181V／T／rtN236T变异。结论：本组资料研究显示,ADV疗效与B、C基因型无关系,且未发现rtA181V／T／rtN236T自然变异及ADV诱发变异,即86例CHB患者阿德福韦酯治疗48周病毒rtA181V／T／rtN236T的变异率为0。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R512.62
【部分图文】：

序列,基序列,基因位点

从治疗有效但HBVDNA仍大于 1.00xl以工U/L的全部患者以及9例治疗无效、1例发生病毒学突破的患者，用ntPCR一DNA直接测序法进行HBvDNA耐药位点检测，所选择标本检测结果显示，均未出现rtA18lV/T/rtN236T变异，结果见图5、6(截取部分扩增PCR产物序列，其中编码rt181位于482一484基因位点，编码rt236在647一649基因位点)。

【参考文献】