壳寡糖对溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用研究

发布时间：2020-10-08 15:38

　　目的:观察壳寡糖(Chitosan Oligosaccharide,COS)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法诱导的小鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)的治疗作用,并探讨其治疗UC的作用机制。方法:将健康小鼠随机分为空白对照组和模型组,模型组小鼠接受TNBS/乙醇溶液灌肠处理,诱导肠道炎症,建立UC小鼠动物模型,将模型组小鼠随机分为模型对照组和壳寡糖(COS)组。将COS组小鼠随机分为12h COS组和24h COS组,两组分别接受COS灌胃处理12h和24h后予以处死。将空白对照组和模型对照组小鼠各随机分为2组(即12h空白对照组,24h空白对照组,12h模型对照组,24h模型对照组),各组分别接受等量生理盐水处理12h或24h。对比各组小鼠的一般状态、形态及组织学(包括肉眼观察和显微镜观察)差异;应用western blot检测壳寡糖组小鼠于壳寡糖治疗前及壳寡糖治疗12h和24h后NF-κB的表达状况。结果:1.各组小鼠的一般状态空白对照组:12h空白对照组、24h空白对照组小鼠均活动敏捷,活动量较多,食欲良好,食量较多,大便成形,不带黏液及脓血,精神状态良好,体重增加。模型组对照组:12h模型对照组、24h模型对照组小鼠均出现活动减少,食欲减退,食量减少,大便不成形,带黏液、脓血,精神不振,体重减轻。壳寡糖组:12h COS组小鼠较模型对照组小鼠活动量增加,食欲好转,食量增加,大便渐成形,大便中所带黏液、脓血减少,精神状态好转,体重不再继续减轻。24h COS组小鼠上述症状均有显著改善,黏液、脓血便显著减少,但与空白对照组相比,上述症状依然略差。2.肉眼观察各组小鼠结肠组织空白对照组:12h空白对照组、24h空白对照组小鼠结肠黏膜组织结构完好,未见炎性病变。模型对照组:12h模型对照组小鼠结肠黏膜大面积充血水肿,边界不清,可见黏膜隆起,结肠壁厚薄不等,肠腔变窄,可见到多发糜烂和多个散在溃疡,溃疡直径多1cm,溃疡周围黏膜充血水肿。24h模型组对照组小鼠结肠黏膜可见直径1cm的多发溃疡。壳寡糖组:12h COS组小鼠结肠黏膜可见多个糜烂面,其周围黏膜组织见充血水肿,无明显溃疡或偶有单个小溃疡。24h COS组小鼠结肠黏膜偶见局限糜烂,其周围黏膜组织见充血水肿,无明显溃疡。对比小鼠结肠黏膜组织损伤肉眼观积分,12h模型对照组(4.5±0.5)明显高于12h空白对照组(0.00±0.00),差异有统计学意义(P0.05)。24h模型对照组(4.67±0.47)明显高于24h空白对照组(0.00±0.00),差异有统计学意义(P0.05)。12h COS组(2.67±0.47)明显低于12h模型对照组(4.5±0.5),差异有统计学意义(P0.05)。24h COS组(1.83±0.69)明显低于24h模型对照组(4.67±0.47),差异有统计学意义(P0.05)。12h COS组(2.67±0.47)与24h COS组(1.83±0.69)相比,差异无统计学意义(P0.05)。3.光学显微镜观察(Tunel染色)各组小鼠结肠组织空白对照组:小鼠结肠黏膜上皮结构完好,未见炎性病变。模型组对照组:溃疡病变初可见上皮细胞坏死,黏膜上皮完整性缺失,隐窝结构破坏,杯状细胞消失,黏膜层和黏膜下层可见组织缺失和坏死病变,内有大量的炎性细胞浸润。12h COS组:可见黏膜炎症,可见到炎性细胞,溃疡处肠黏膜覆盖不全,溃疡修复区域黏膜较薄,溃疡修复区域可见新生上皮细胞,杯状细胞较处理前增多,可见到新生成的腺体结构。24h COS组:溃疡修复区域炎性细胞浸润减少,杯状细胞数量显著恢复,局部区域黏膜增厚,可见大小不一增生腺体。对比小鼠结肠黏膜组织病理积分,12h模型对照组(8.00±0.63)明显高于12h空白对照组(0.00±0.00),差异有统计学意义(P0.05)。24h模型对照组(8.17±0.75)明显高于24h空白对照组(0.00±0.00),差异有统计学意义(P0.05)。12h COS组(3.67±0.52)明显低于12h模型对照组(8.00±0.63),差异有统计学意义(P0.05)。24h COS组(3.83±0.41)明显低于24h模型对照组(8.17±0.75),差异有统计学意义(P0.05)。12h COS组(3.67±0.52)与24h COS组(3.83±0.41)相比,差异无统计学意义(P0.05)。4.壳寡糖对NF-κB表达的影响western blot检测结果显示壳寡糖组小鼠于壳寡糖处理12h,24h后NF-κB的表达较壳寡糖处理前明显下降。结论:1.壳寡糖可有效改善TNBS/乙醇法诱导的UC小鼠的一般状态和肠道炎症反应。2.壳寡糖对UC小鼠的改善作用与抑制NF-κB的表达相关。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R574.62
【部分图文】：

肉眼,显微镜下

24h COS 组 6 1.83±0.69b,c图1 各组小鼠结肠组织损伤肉眼评分3 光学显微镜观察(Tunel 染色)各组小鼠结肠组织各组小鼠结肠组织显微镜下表现，见图 2。

壳寡糖

结果8图3 各组小鼠结肠组织损伤病理评分4 壳寡糖对 NF-κB 表达的影响壳寡糖组小鼠于壳寡糖处理 12h，24h 后 NF-κB 的表达较壳寡糖处理前明显下降，表明壳寡糖可有效抑制 NF-κB 表达。见表 3，图 4。表3 壳寡糖处理对NF-κB表达的影响壳寡糖处理前壳寡糖处理12h 壳寡糖处理24hNF-κB 745±5 324±2 437±20h 12h 24hNF-κB

壳寡糖,肠黏膜,小鼠

壳寡糖处理对小鼠肠黏膜NF-κB的表达影响

【参考文献】