重症急性胰腺炎中肠上皮氧化应激与自噬对肠粘膜屏障的影响及机制研究

发布时间：2020-10-10 11:53

　　 目的:重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是一种发病急、并发症多、死亡率高的急腹症,常伴有全身炎症反应综合征、脓毒症甚至器官功能障碍。它能够导致肠粘膜屏障损伤,这种损伤与肠粘膜氧化应激和自噬水平的改变有关。我们旨在探讨肠粘膜自噬和氧化应激之间的相互作用对重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障损伤的影响。方法:选取健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为两组:SAP组(n=30)和假手术(sham operation,SO)组(n=10)。适应性饲养2周后,将大鼠称重并用3%戊巴比妥钠(20mg/kg体质量)腹腔注射麻醉。消毒后选择右侧旁正中小切口打开腹腔,用血管夹在肝门部阻断胰胆管。采用逆行胆胰管穿刺法,使用微量泵连接24G套管针缓慢泵入(10min泵入)牛磺胆酸钠(5%、1ml/kg)诱导SAP模型。在诱导SAP 24h后经大鼠下腔静脉穿刺抽血,用16S r DNA序列分析法检测细菌易位(BT)。所有大鼠均在诱导SAP 24h后处死。通过HE染色观察胰腺组织和肠组织的病理变化,并根据评分标准分别对各组胰腺及肠组织进行病理评分;同时使用全自动生化分析仪分别测定血液样本中血清淀粉酶和脂肪酶水平。采用分光光度法测定肠上皮组织氧化应激水平,通过测定肠组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平来确定组织氧化应激状态。用Western blot技术检测大鼠肠上皮组织样本中紧密连接(tight junction,TJ)蛋白(Zonula occluden-1,ZO-1)、Occludin、Claudins-1、Claudin-2的表达。用RT-PCR技术检测大鼠肠上皮组织中TJ蛋白ZO-1、Occludin、Claudins-1、Claudin-2 m RNA的表达。同样用Western blot检测大鼠肠上皮组织中自噬蛋白LC3II和Beclin1的表达情况。采用免疫荧光染色法检测大鼠肠上皮紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-2和自噬蛋白LC3II的分布情况。结果:重症急性胰腺炎组30只大鼠在造模后10h到24h内有13只发生死亡,17只存活(死亡率43.33%),假手术组无大鼠发生死亡。根据血16S r DNA序列分析结果,将SAP大鼠分为:BT(+)组(n=9)和BT(-)组(n=8)。SAP组胰腺和肠组织的损伤程度显著高于对照组(P0.01)。SAP组血清淀粉酶、脂肪酶水平显著高于对照组(P0.01)。SAP组血清淀粉酶、脂肪酶水平与胰腺损伤程度一致。与BT(-)组相比,BT(+)组MDA的含量明显升高(P0.01),而SOD和GPx活性降低(P0.05,P0.01)。SAP组LC3II和Beclin1的表达显著高于SO组(P0.01),而BT(-)组LC3II和Beclin1水平明显高于BT(+)组(P0.05)。SAP组紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1表达显著低于SO组,而Claudin-2水平升高(均P0.01);与BT(-)组相比,BT(+)组Claudin-2水平升高(P0.05),而紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1表达减低(均P0.01)。结论:SAP大鼠模型的肠粘膜自噬是激活的,肠粘膜自噬的激活可抑制和减轻SAP引起的氧化应激对肠黏膜屏障功能的损伤。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R576
【部分图文】：

12图 1 SAP 大鼠血液样本中细菌进化树分析3 血清淀粉酶和脂肪酶水平血清淀粉酶和脂肪酶的检测结果如图 2 所示，SAP 组与 SO 组血清淀粉酶和脂肪酶水平之间的差异具有统计学意义（P＜0.01）。而 BT（+）组与 BT（-）组血清淀粉酶和脂肪酶水平差异不显著（P＞0.05）。

图 2 血清淀粉酶和脂肪酶水平**P<0.01 vs SO 组。4 胰腺和回肠组织病理变化使用牛磺胆酸钠诱导 24 小时后，在光镜下观察胰腺和肠道的形态学改变，根据前面提到的标准进行评分。SO 组胰腺（A）及肠上皮（E）无明显病理学改变。SAP 组胰腺（D）和肠（H）损伤的组织学评分显著高于对照组，差异有统计学意义（p＜0.01）。BT(+)组（B）和 BT（-）组（C）胰腺组织表现出广泛的腺泡细胞坏死，小叶结构模糊，间质水肿和出血以及炎性细胞沿坏死胰腺浸润。BT(+)组（F）和 BT（-）组（G）肠组织显示大量炎性细胞浸润于肠壁，局部出血坏死，黏膜腺体减少，排列稀疏。这些变化表明我们的模型已经成功建立。BT（+）组和 BT（-）组的胰腺和肠粘膜间病理评分无显著差异（P＞0.05）。具有代表性的重症急性胰腺炎引起的胰腺组织损伤和肠组织损伤照片见图 3。

图 3 胰腺和肠 HE 染色**P<0.01 vs SO 组。5 肠上皮 SOD、GPX 活性和 MDA 含量为了探讨自噬在 SAP 的氧化应激之间的关系，我们测定了肠粘膜 MDA 含量、SOD和 GPX 的活性。在 SAP 组 SOD 和 GPX 活性显著低于 SO 组（P＜0.01）。与对照组相比，SAP 组 MDA 含量显著升高（p＜0.01）。此外，BT（-）组和 BT（+）组之间的 SOD、GPX 活性和 MDA 含量明显不同（P＜0.05，图 4）。
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 Wen-Sheng Deng;Jian Zhang;Hui Ju;Hong-Mei Zheng;Jiang Wang;Su Wang;Dian-Liang Zhang;;Arpin contributes to bacterial translocation and development of severe acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年14期

2 Rui Tian;Rui-Lan Wang;Hui Xie;Wei Jin;Kang-Long Yu;;Overexpressed miRNA-155 dysregulates intestinal epithelial apical junctional complex in severe acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2013年45期

本文编号：2835153