生长抑素对瘦素诱导肝星状细胞的活化增殖、PTP1B表达及JAK2-STAT3通路的影响

发布时间：2020-10-12 17:04

　　 目的研究生长抑素对瘦素诱导大鼠肝星状细胞(HSC)的活化增殖、蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)表达及JAK2-STAT3通路的影响,探讨生长抑素抗肝纤维化的相关机制。方法以重组大鼠瘦素作用于HSC-T6细胞(100 ng/ml),同时加入各浓度的生长抑素(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)。在处理24 h后,采用CCK-8法检测HSC增殖的变化,免疫细胞化学检测p-JAK2及p-STAT3蛋白表达,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和PTP1B的mRNA表达。结果 CCK-8法显示生长抑素可通过剂量依赖方式抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖(P0.05);免疫细胞化学检测显示,生长抑素组HSC-T6细胞质p-JAK2及细胞核内p-STAT3蛋白表达明显低于瘦素对照组(P0.05);RT-PCR法检测生长抑素干预组HSCα-SMA mRNA的表达较瘦素对照组及空白对照组明显降低(P0.05),而PTP1B的mRNA表达量升高(P0.05)。结论生长抑素能上调PTP1B的表达,阻断瘦素在HSC内JAK2-STAT3信号通路的转导,并且抑制瘦素诱导HSC的活化与增殖。
【部分图文】：

个条带积分光密度，与对应的内参gapdh的比值作为半定量值。1．6统计学处理采用SPSS19．0软件进行分析，数据以x珋±s表示。方差分析进行多组间差异统计及LSD法进行组间两两比较。2结果2．1生长抑素对细胞增殖的影响CCK-8法检测细胞抑制率显示:生长抑素呈剂量依赖性抑制瘦素诱导HSC-T6增殖，以400ng/ml浓度时最为明显，其A值最大，抑制率为21.92%，各组间差异有统计学意义(F=28.6889，P＜0.05)。生长抑素各浓度组与瘦素对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，空白对照组显著低于瘦素对照组(P＜0.05)。见表2，图1。表2不同浓度生长抑素对HSC增殖的影响(n=6，x珋±s)组别生长抑素(mol/L)A值抑制率(%)空白对照00．8815±0．0256－瘦素对照(含瘦素100ng/ml)00．9556±0．0293#－生长抑素(含瘦素100ng/ml)10－100．8755±0．0307*8．3910－90．8583±0．0368*10．1810－80．8292±0．0379*13．2410－70．7942±0．0290*16．9010－60．7462±0．0233*21．92与瘦素对照组比较:*P＜0．05;与空白对照组比较:#P＜0．05图1不同浓度生长抑素对HSC增殖的影响1:空白对照组;2:瘦素对照组;3～7:生长抑素10－10、10－9、10－8、10－7、10－6mol/L浓度组;与瘦素对照组比较:*P＜0．05;与空白对照组比较:#P＜0.05·1388·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Oct;49(10)

图2生长抑素对胞内p-JAK2和p-STAT3蛋白表达的影响二步法×400A:瘦素对照组;B:生长抑素组;C:空白对照组;1:p-JAK2;2:p-STAT32．2生长抑素对p-JAK2蛋白表达的影响p-JAK2的表达见于HSC-T6细胞的胞质，表现为棕黄色颗粒样，见图2。空白对照组HSC-T6细胞中p-JAK2表达较少，在瘦素作用24h后浓度的增大，表达增加，OD值差异有统计学意义(0.0660±0.0020vs0.1269±0.0041，P＜0.05)，而生长抑素组与瘦素对照组比较表达显著减少，OD值降低(0.0965±0.0025vs0.1269±0.0041，P＜0.05)。2．3生长抑素对p-STAT3蛋白表达的影响p-STAT3的表达见于HSC-T6细胞的胞核或核周，表现为棕黄色颗粒样，见图2。空白对照组HSC-T6细胞中p-JAK2表达较少，在瘦素作用24h后浓度的增大，表达增加，OD值差异有统计学意义(0.1538±0.0065vs0.2097±0.0058，P＜0.05)，而生长抑素组与瘦素对照组比较表达显著减少，OD值降低(0.1846±0.0034vs0.2097±0.0058，P＜0.05)。2．4生长抑素对α-SMAmＲNA表达的影响空白对照组、瘦素对照组和生长抑素组间比较差异有统计学意义(F=69.9969，P＜0.05)。瘦素对照组在瘦素作用HSC-T6细胞24h后α-SMAmＲNA相对内参的表达量为1.3035±0.0205，高于空白对照组的1.1284±0.0195(P＜0.05)。生长抑素组α-SMAmＲNA相对内参的表达量为1.1238±0.0234，显著低于瘦素对照组(t=10.004，P＜0.05)，而与空白对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，见图3。图3α-SMAmＲNA的表达A:电泳图;B:相对表达量;M:Marker;1:瘦素对照组;2:生长抑素组;3:空白对照组;与瘦素对照组比较:*P＜0．05;与空白对照组比较:#P＜0.052．5生长抑素对PTP1BmＲNA表达的影响空白对照组、瘦素对照组和生长抑素组间比较差异有安徽医

长抑素组与瘦素对照组比较表达显著减少，OD值降低(0.1846±0.0034vs0.2097±0.0058，P＜0.05)。2．4生长抑素对α-SMAmＲNA表达的影响空白对照组、瘦素对照组和生长抑素组间比较差异有统计学意义(F=69.9969，P＜0.05)。瘦素对照组在瘦素作用HSC-T6细胞24h后α-SMAmＲNA相对内参的表达量为1.3035±0.0205，高于空白对照组的1.1284±0.0195(P＜0.05)。生长抑素组α-SMAmＲNA相对内参的表达量为1.1238±0.0234，显著低于瘦素对照组(t=10.004，P＜0.05)，而与空白对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，见图3。图3α-SMAmＲNA的表达A:电泳图;B:相对表达量;M:Marker;1:瘦素对照组;2:生长抑素组;3:空白对照组;与瘦素对照组比较:*P＜0．05;与空白对照组比较:#P＜0.052．5生长抑素对PTP1BmＲNA表达的影响空白对照组、瘦素对照组和生长抑素组间比较差异有安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Oct;49(10)·1389·
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本文编号：2838039