白细胞介素-23受体在克罗恩病中的表达及作用机制研究

发布时间：2020-10-13 18:57

　　 克罗恩病(Crohn's Disease, CD)作为是一种肠道非特异性炎性肉芽肿性疾病,其发病机制与Th17细胞的细胞免疫有关。同时在Th17细胞的分化过程中,IL-23/IL-17信号通路起到关键作用。而IL-23R的具体作用,目前不详。 本研究检测CD和正常人在肠道黏膜中的IL-23R和IL-17A的表达。同时在体外应用磁珠分选人外周血的CD4+T细胞,并由细胞因子诱导分化成Th17细胞。同时应用外源性加入抗人IL-23R单克隆抗体,观察其对Th17细胞的分化影响。 第一部分白细胞介素23受体、白细胞介素17A在克罗恩病中的表达及临床意义 目的：通过检测白细胞介素23受体(IL-23R)及白细胞介素17A(IL-17A)在克罗恩病(CD)患者肠黏膜中的表达水平,探讨其在CD发病过程中的作用及意义。方法：收集32例克罗恩病(CD)患者及27例对照者的内镜肠黏膜活检标本,采用荧光定量PCR技术检测肠黏膜内IL-23R、IL-17A mRNA的表达情况,免疫组化技术分析IL-23R、IL-17A在肠黏膜中的原位表达。结果：与健康对照组相比,CD患者肠黏膜组织内IL-23R mRNA表达显著增高(P0.05)。CD患者肠黏膜组织内IL-17A mRNA表达显著增高(P0.05)。免疫组化分析显示IL-23R阳性细胞在CD在肠黏膜固有层内有较多表达,较正常黏膜内的肠上皮细胞相比,CD患者肠黏膜IL-23R蛋白表达量最著增高(P0.05)。IL-17A阳性细胞在CD肠黏膜固有层内有较多表达,较正常黏膜内的肠上皮细胞相比,CD患者肠黏膜IL-17A蛋白表达量最著增高(P0.05)。结论：IL-23R及IL-17A在CD患者肠黏膜中表达显著增高,提示IL-23R及IL-17A表达异常与CD的发生发展密切相关,有可能成为CD治疗的新靶点。 第二部分IL-23R抗体对外周血CD4+T细胞分化的影响 目的：观察抗人IL-23R单克隆抗体对于CD4+T细胞分化为Thl7细胞的过程的影响。方法：收集人外周血细胞,应用磁珠分选出CD4+T细胞,并应用TNF-β1和IL-6诱导分化成Th17细胞,在应用IL-23R单克隆抗体干预Th17细胞的分化过程。应用荧光定量PCR和Western-Blot检测IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表达。结果：应用磁珠分选可以提取CD4+T细胞,同时应用细胞因子(TNF-β1和IL-6)诱导分化成Th17细胞,同时IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表达明显增高。在Th17细胞的分化过程中,应用抗人IL-23R单克隆抗体,可以抑制。IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表达。结论：Th17细胞的分化过程中,存在着IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表达增高,而应用抗人IL-23R单克隆抗体干预,可抑制IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表达,抑制Th17细胞的分化。
【学位单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R574.62
【部分图文】：

图1.2各基因PCR后的扩增曲线和溶解曲线. 3. 2 IL-23R与IL-17A蛋白在结肠黏膜中的表达情况疫组化染色显示，相对于正常结肠點膜，IL-23R阳性细胞主要CD患者炎症肠點膜的固有层单个核细胞内，胞质中见棕黄色颗粒。膜的IL-23R阳性细胞数明显减少，见图1.3。CD组及正常组的IL-23R阳性细胞百分率分别为10.6%±3.2%、1.7% 土 0.7°/^。比明显升高(代0. 05)。L-17A主要分布于活动期CD患者炎症肠點膜的肌层单个核细胞内，色颗粒。而正常结肠點膜的IL-17A阳性细胞数明显减少，见图常组的结肠點膜固有层IL-17A阳性细胞百分率分别为15.2% 土 ±1.1%。CD与对照组相比明显升高(代0. 05)。

图1. 3 IL-23R及IL-17A结肠點膜免疫组化染色第四节讨论CD是由多种病因所致的复杂性疾病，其确切发病机制仍不清楚，目素在CD发病机制中的作用日益受到重视。近年来普遍研究认为，肠的调节异常在很大程度上与某些抗炎因子的活性增强或表达增加相hl7细胞的免疫学特征及其在炎症性肠病发病机制中的免疫病理作用热点[^。同时近年来多数学者认为IL-23/IL-17通路模式在im)发病置_。目前有研究认为IL-23并不能直接诱导原始T细胞分化为Thl7细胞，诱导Thl7细胞增殖，并且体外试验也发现IL-23可以为已经分化的T供生存信号_。其机制可能是在炎症状态下，IL-6或TGF-e和IL-6以上调Thl7细胞表达IL-23R，进而促进IL-23维持并加强Thl7细’'8]。而对于IL-23R在炎症性肠病的表达的研究，主要认为是IL-23R位突变可能是克罗恩病的发病机制之一[‘9’"]。而IL-17作为最近发现

2. 3.1单核细胞的细胞活力检测及分离率采用台盼蓝染色法提示所得细胞存活率为(97. 8±0. 8)%。收集到单核细胞数量为为(2. 12±0. 13) X Icre/mL。各组细胞四天培养后，细胞细胞存活率为(98. 4±1.6)%。（见图 2. 1)I ■‘ ■‘ - ■■ — ■ - ? —■ ■ ■ ■ ?? I
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本文编号：2839573