益生菌对TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接Claudin-1蛋白保护作用的研究

发布时间：2020-10-13 23:54

　　 目的：研究益生菌对三硝基苯磺酸（trinitro-benzen-sulfonic acid，TNBS）诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白Claudin-1的调控，进一步探讨益生菌对实验性大鼠结肠炎肠黏膜屏障的保护作用。方法：SD大鼠（雄性）28只，分为三组：正常对照组（A组，n=8）、模型组（B组，n=10）、益生菌治疗组（C组，n=10）。TNBS诱导大鼠结肠炎模型：SD大鼠术前禁食24h，B组和C组分别用一直径约2mm、长约12cm的硅胶管由肛门轻缓插入深约8cm，以含80mg/kgTNBS的等体积50%乙醇溶液约0.85ml缓慢注入结肠，使肛门抬高30度3-5分钟，A组则以等体积生理盐水灌肠。动物完成造模后，A组和B组第1~7天每只大鼠每天用1ml蒸馏水灌肠1次；C组每只大鼠第1~7天每天用金双歧2Co/只磨成粉末，用蒸馏水配制成1ml溶液灌肠；各组大鼠正常饲养。每天观察各组大鼠的活动、大便和体重等情况。造模后第8天戊巴比妥钠麻醉后取内眦血测定血浆D-乳酸、TNF-α和血清IL-8。断颈处死大鼠后取下整段结肠并纵向剪开，用生理盐水清洁肠内污物后观察标本有无充血水肿、有无溃疡及活动性出血等；每只大鼠取相同部位2cm结肠组织，福尔马林液固定，用于行HE染色及免疫组织化学法检测Claudin-1蛋白的表达；余下标本用3%戊二醛预固定用于透射电镜观察结肠组织超微结构改变。 结果：一般情况：在造模后第1天，B组出现腹泻伴肉眼血便或粪便隐血试验阳性或强阳性，大鼠出现精神活动差，饮食减少，体重下降。第2~5天腹泻最重，5~6天后血便逐渐减轻，食量恢复。C组大鼠于造模后第1天开始出现大便稀溏或不成形，出现精神活动稍差，饮食减少，大便多表现为隐血阳性，4天后腹泻、隐血便减轻，活动增多，食量恢复。A组造模后1天精神饮食均恢复正常。疾病活动指数（DAI）： A组、B组和C组分别是0.49±0.43、3.17±0.43和2.08±0.57，各组比较差异均有显著性意义（P0.05）；组织学损伤评分：A组、B组和C组分别是1.0±0.76、3.1±1.20、2.1±1.1，各组比较差异均有显著性意义（P0.05）；血浆TNF-α水平：A组、B组和C组分别是35.13±18.37、172.72±17.07、57.20±19.66，各组比较差异均有显著性意义（P0.05）；血浆D-乳酸水平：A组、B组和C组分别是5.267±7.38、12.66±2.68、11.50±7.31，其中B组和C组与A组比较差异有显著性意义（P0.05）；但是B组和C组比较差异无显著性意义（P0.05）。血清IL-8水平：A组、B组和C组分别是3.32±2.28、9.18±2.04、5.84±2.37，各组比较差异均有显著性意义（P0.05）；③结肠肠上皮细胞紧密连接蛋白Claudin-1的表达：A组、B组和C组免疫组化结果显示各组之间差异均有显著性意义（P0.05）。透射电镜结果显示：A组肠绒毛密集、排列整齐、内质网无扩张、线粒体无肿胀、核糖体结构完整，紧密连接正常；B组肠绒毛稀疏、紊乱、线粒体肿胀、内质网扩张、紧密连接增宽；C组与B组比较略有改善，但与A组比较仍有差异。 结论:益生菌对TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜屏障具有明显的保护作用，其作用机制可能是通过上调肠上皮细胞紧密连接蛋白Claudin-1的表达，减轻肠黏膜组织的损伤，降低肠黏膜的通透性，从而达到抗炎作用。
【学位单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R574.62
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
目录
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
综述：益生菌对肠黏膜屏障紧密连接蛋白保护作用的研究进展
    摘要
    1 紧密连接蛋白组成特点、调节途径及功能
    2 紧密连接蛋白与 IBD
    3 益生菌对肠黏膜屏障紧密连结蛋白的保护作用
    4 结论与展望
    参考文献
附录
个人简历
攻读学位期间发表的学术论文

【参考文献】

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本文编号：2839873