据世界卫生组织估计全球约有1.8亿以上的丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染者,且约有80%发展成为慢性肝炎,甚至发展成肝硬化和肝癌,因此HCV感染已成为全球亟待解决的公共卫生问题。 HCV目前分为六种基因型和多种亚型。HCV基因型的分布具有明显的地理区域特性,是流行病学调查的重要指标。然而近年来有报道发现西方国家HCV基因型的分布随着其主要感染方式的改变出现了明显的变化。 中国自上世纪九十年代早期开始对血液和血液制品进行强制性HCV筛查以来,通过输血或血液制品感染HCV的人数已明显下降,然而静脉吸毒者明显增加。中国西南地区与世界主要毒品生产地之一的东南亚国家相邻,更是静脉吸毒的高发地。因此,我们猜测静脉吸毒可能已成为西南地区新发HCV感染的主要途径,东南亚国家的主要基因型(3型和6型)也可能随之逐渐传入,从而使该地区HCV基因型的分布更加多样化。 有研究认为多次暴露的患者有可能同时或先后感染不同基因(亚)型HCV而产生混合感染。不同基因(亚)型HCV感染同一宿主后一般只有一种基因(亚)型先成为优势基因(亚)型,但随访过程中优劣势基因(亚)型可以发生转换。最近还报道了多种不同基因(亚)型HCV间的重组体病毒。不同基因(亚)型HCV混合感染及混合感染后在宿主体内的生存状态变化对丙型肝炎的防治可能带来更大挑战,但目前报道的不同基因(亚)型HCV混合感染率存在明显差异,混合感染后发生基因重组和优劣势基因(亚)型转换的机率更是存在很大争议。既然具有多次暴露机会的静脉吸毒可能已成为西南地区新发HCV感染的主要途径,且该地区HCV基因型的分布呈现明显多样化,这在理论上更加增加了宿主感染多种基因(亚)型HCV的可能性。因此,研究该地区不同基因(亚)型HCV混合感染情况已刻不容缓。 HCV基因型也是影响聚乙二醇干扰素(pegylated-interferon,PEG-IFN)联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎患者疗效和疗程的主要因素。西方发达国家主要以HCV1型、2型和3型为主,目前对这些基因型HCV感染者的抗病毒治疗研究较多。HCV2型和3型对治疗的敏感性较好,治疗24周约有80%可以获得持续病毒学应答(sustainedvirological response,SVR);HCV1型对治疗的敏感性较差,治疗48周仅约有50%的患者可以获得SVR。然而,对HCV4型、5型和6型感染者的抗病毒治疗至今还研究较少。随着西南地区HCV6型感染者的逐渐增多,研究HCV6型感染者对抗病毒治疗的疗效预测和疗程优化也显得非常重要。 因此,本研究连续收集2006年1月至2009年3月间西南医院感染科门诊及住院的HCV感染者的血清标本和临床资料,系统分析HCV基因型和感染方式的分布情况及变化规律;应用目前公认的准确性最好的CE1区PCR克隆测序法对24份随机抽取的具有多次暴露机会的HCV感染者的血清标本进行不同基因(亚)型HCV混合感染的检测,同时对反复暴露的患者中所有能够收集到的随访系列血清标本进行HCV基因(亚)型的纵向比较,并在较大范围内筛查不同基因(亚)型HCV间的重组体病毒;对2010年3月以前完成PEG-IFN联合利巴韦林抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者的疗效进行回顾性分析。 主要研究结果 1、371例HCV基因分型成功的患者中,HCV1a亚型3例(0.8%),1b亚型156例(42.0%),2a亚型36例(9.7%),3a亚型45例(12.1%),3b亚型78例(21.0%),4a亚型1例(0.3%)和6a亚型52例(14.0%)。HCV3型和6型所占的比例,40岁或40岁以下年龄组(63.6%)明显高于40岁以上年龄组(21.6%,P=0.000),1997年以后感染者(54.4%)明显高于1997以前感染者(27.3%,P=0.001),静脉吸毒的感染者(85.4%)明显高于其他感染者(32.5%,P=0.000)。多因素回归分析显示:年龄在40岁或40岁以下(OR=3.880;95%CI:2.303-6.537,P=0.000)和有静脉吸毒史(OR=8.115;95%CI:4.270-15.421, P=0.000)是HCV3型和6型的独立预测因素。静脉吸毒者占总病例数的27.8%,且40岁或40岁以下年龄组(40.4%)明显高于40岁以上年龄组(7.1%,P=0.000),1997年以后感染者(40.3%)明显高于1997以前感染者(16.2%,P=0.000)。 2、用PCR克隆测序法对具有多次暴露机会的HCV感染者进行不同基因(亚)型HCV混合感染的检测,发现47.4%(9/19))的病人和45.8%(11/24)的标本存在混合感染。20例静脉吸毒者和6例维持性血液透析者能够收集到两次或两次以上HCV RNA定量为阳性的随访系列血清标本,对每例患者的随访系列血清标本进行HCV基因(亚)型的纵向比较,均未发现HCV基因(亚)型发生转换。对来自222例患者的243份血清标本(其中包括107份来自92例静脉吸毒者,26份来自20例血液透析者,110份来自110例其他感染者)分别以CE1区和NS5B区作为靶序列进行测序遗传树比对分析基因分型,未发现两区基因分型结果不一致者。其中有两例患者确定存在不同基因型HCV混合感染分别达5月与12月,仍未见优势基因型转换及发生基因重组。 3、对103例已完成PEG-IFN联合利巴韦林抗病毒治疗者(其中HCV2型、3型和6型感染者治疗24周,HCV1型感染者治疗48周)的疗效进行回顾性分析发现:HCV6a感染者获得SVR的比例(81.8%)与HCV2型或3型感染者(83.3%,P=0.879)相似,高于HCV1b型感染者(59.0%,P=0.068)。HCV6a感染者获得快速病毒学应答(rapid virological response, RVR)、早期病毒学应答(early virological response, EVR)和治疗末病毒学应答(end of treatment virological response, ETVR)的比例分别为83.3%、95.5%和90.9%,均与HCV2型或3型感染者无统计学差异,高于HCV1b型感染者。在获得ETVR者中,HCV6a感染者的复发率为10.0%,低于HCV2型或3型感染者(12.5%)和HCV1b感染者(23.3%),但无统计学差异(P=0.344)。RVR(86.7% vs. 90.0%,P=0.683)和EVR(85.7% vs. 86.8%,P=0.904)的阳性预测值,HCV6a型感染者与HCV2型或3型感染者无统计学差异。3例未获得RVR的HCV6a型感染者完成24周疗程后,2例获得EVR者均获得SVR,但1例未获得EVR者亦未获得SVR。 结论 1、静脉吸毒已成为西南地区新发HCV感染的主要方式,也是HCV3型和6型的主要传播途径,HCV3型和6型在该地区的比例也已明显增加。 2、虽然具有多次暴露机会的患者不同基因(亚)型HCV的混合感染率较高,但具有随访系列血清标本的高危感染者并未发现HCV优势基因(亚)型的变化;西南地区目前也未发现不同基因(亚)型HCV间的重组体病毒。 3、HCV6型感染者应用PEG-IFN联合利巴韦林治疗24周的疗效,与HCV2/3型感染者相似,优于HCV1型感染者治疗48周。
【学位单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R512.6
【部分图文】：
第三军医大学硕士学位论文析由 DNA ABI PRISM 3730 序列分析仪完成。测序结果与参考序列的遗传树比对分析用 NCBI 上的 Viral Genotyping Tool 完成。HCV 基因分型的操作页面如图 1-1 所示。具体网址为 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/genotyping/formpage.cgi。
图 1-2 CE1 区 RT-1stPCR 产物的琼脂糖凝胶电泳图。M 为 DNA Marker DL2000，从上至下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，N 为阴性对照，1、2、4 标本血清 HCV RNA≥108拷贝/ml，3、6 标本血清 HCV RNA 定量均为 107拷贝/ml，5 标本血清 HCV RNA＜107拷贝/ml，目的 DNA 片段约 494bp。图 1-3 CE1 区 2ndPCR 产物的琼脂糖凝胶电泳图。M 为 DNA Marker DL2000，从上至下依次为 2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，N 为阴性对照，1、2、3、4 标本血清HCV RNA≥103拷贝/ml，目的 DNA 片段约473bp。二、HCV 基因型的分布情况及变化规律1、HCV 基因型的分布情况1a1%1b4a0%6a14%
图 1-2 CE1 区 RT-1stPCR 产物的琼脂糖凝胶电泳图。M 为 DNA Marker DL2000，从上至下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，N 为阴性对照，1、2、4 标本血清 HCV RNA≥108拷贝/ml，3、6 标本血清 HCV RNA 定量均为 107拷贝/ml，5 标本血清 HCV RNA＜107拷贝/ml，目的 DNA 片段约 494bp。图 1-3 CE1 区 2ndPCR 产物的琼脂糖凝胶电泳图。M 为 DNA Marker DL2000，从上至下依次为 2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，N 为阴性对照，1、2、3、4 标本血清HCV RNA≥103拷贝/ml，目的 DNA 片段约473bp。二、HCV 基因型的分布情况及变化规律1、HCV 基因型的分布情况1a1%1b4a0%6a14%
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本文编号：
2842038
