BMSCs调控尿激酶型纤溶酶原激活物及其抑制剂促进大鼠HSCs凋亡机制

发布时间：2020-10-18 16:20

　　 目的：探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)通过诱导肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSCs)分泌尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator, uPA)及抑制其活性特异性抑制剂一纤溶酶激活物抑制剂-1(type-1plasminogen activator inhib-itor,PAI-1),调节星状细胞凋亡的机制。 方法：BMSCs分离、培养、传代至第4代,大鼠原代HSCs系及纤维原细胞系冻融后传代使用。应用6孔朔料培养板,建立上下双层细胞共培养体系。实验分为5组：①正常共培养组：BMSCs与HSCs共培养；②HSCs空白对照组：HSCs单独培养；③HSCs阴性对照组：纤维原细胞与HSCs与共培养；④uPA特异性抑制剂干预组：C17H13N3O2· CF3CO2H(UK122)干预后BMSCs与HSCs共培养组；⑤BMSCs空白对照组：BMSCs单独培养。以上体系培养观察24h、48h、72h,各时间段于倒置相差显微镜下动态观察HSCs细胞形态学改变；采用ELISA、荧光定量PCR检测uPA及PAI-1质量浓度及mRNA相对表达量,用MTT法检测各组的细胞增殖抑制率,并确定UK122的最佳干预浓度；应用流式细胞仪Annexin-V-FITC/PI双染法检测HSCs细胞凋亡情况；Western blot检测肝细胞生长因子重链(α-chain in Hepatocyte growth factor, HGF-α)蛋白表达。 结果：1.RT-PCR检测共培养后各组HSCs uPA和PAI-1mRNA表达：正常共培养组HSCs的PAI-1mRNA表达量(24,48,72h：0.42±0.01,0.54±0.01,0.82±0.01)明显低于相应时段的HSCs空白对照组(24,48,72h：1.07+0.01,1.09±0.04,1.41±0.03)(P0.01)；正常共培养组uPAmRNA表达量(24,48,72h：1.55±0.06,1.96±0.05,2.95±0.03)则较HSCs空白对照组(24,48,72h：1.07±0.06%,1.17±0.06,1.28±0.02)增加(P0.01),且呈现时间依赖性。2.与HSCs空白对照组(24,48,72h：4.46±0.47%,5.35±0.36%,6.09±0.49%)相比,正常共培养组的HSCs在与BMSCs细胞共培养24h后开始表现明显增殖抑制(24,48,72h：10.95±0.44%,31.39±2.31%,46.1±2.77%)(P0.01),且呈现时间依赖性；加入UK122后HSCs增殖抑制减少,以1μg/ml为UK122最佳干预浓度；Western blotting及流式细胞仪Annexin-V-FITC/PI双染法检测发现BMSCs与HSCs共培养24h后,BMSCs促进HGF-α的蛋白表达及HSCs凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。UK122干预后HGF-α表达下降,HSCs凋亡减少。与正常共培养组比较差异有统计学意义(P0.01)。 结论：BMSCs可通过促进星状细胞分泌uPA,抑制PAI-1分泌,使HGF-α表达增加,从而促进星状细胞凋亡。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R575.2
【文章目录】：
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摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
结果
讨论
小结
参考文献
综述
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致谢
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【共引文献】

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本文编号：2846529