体外培养小鼠小肠Cajal间质细胞及SCL转基因对其表达c-kit的影响

发布时间：2020-10-19 13:27

　　 Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)是胃肠慢波的起搏细胞(pacemakercells)。ICC缺失与糖尿病性胃肠动力紊乱、慢传输性便秘、慢性假性肠梗阻等众多胃肠动力紊乱性疾病密切相关。酪氨酸激酶受体c-kit是胃肠道ICC的特异性标志,干细胞因子(stem cell factor,SCF)与c-kit结合后所启动的信号通路,对ICC发育、分化及表型维持稳定至关重要。多种外源性因素均可通过下调c-kit表达使ICC失去正常的表型特征,如对c-kit反应呈阴性,而对部分平滑肌抗原反应呈阳性,细胞突起变短或消失,ICC数目减少并直接导致胃肠道平滑肌慢波丧失,但并未发现细胞凋亡或坏死。如何使发生表型转化的ICC通过重建c-kit信号通路实现表型逆转,是医学工作者面临的一个难题。 相关研究发现,c-kit转录调控区存在核转录因子SCL(stem cell leukemia,SCL)结合位点,SCL主要是通过作用于c-kit基因启动子调节c-kit表达来发挥其“生存基因”的功能,其对SCF依赖型细胞以及CD34(CD34~+)阳性细胞的生存具有重要的调控作用,可强烈上调造血细胞、多种干细胞以及其他多种CD34~+细胞表达c-kit,CD34~+的TL-1细胞转染反义SCLcDNA后c-kit表达明显降低,并对SCF失去反应性,而SCL过表达则可使c-kit表达升高并对SCF反应性恢复正常,可见SCL在c-kit表达调控中发挥重要作用。ICC是SCF依赖型且CD34~+的细胞,但目前尚无有关SCL对ICC表达c-kit调控作用的报道。我们由此设想,通过上调体外培养ICC内SCL表达和活性水平,达到促进ICC表达c-kit的目的,从而为通过重建c-kit信号通路促进表型受损ICC恢复表型奠定基础。 体外培养ICC方法是研究细胞功能以及细胞信号转导机制的重要方法,相对体内研究而言影响因素单一。目前,有关ICC的体外培养,国外的研究尚少,国内尚未见报道。在本课题研究,我们拟在建立ICC体外培养方法的基础上,构建SCL表达载体,并通过转基因技术上调体外培养小鼠小肠ICC内核转录因子SCL蛋白表达水平和转录活性,进而探讨SCL转基因对体外培养小鼠小肠ICC表达c-kit的影响。本研究有望为从核转录水平治疗以ICC减少为背景的胃肠动力紊乱性疾病奠定理论基础。
【学位单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R574
【部分图文】：

一、免疫荧光鉴定免疫荧光染色后，在激光共聚焦显微镜下观察，CIC表面c一kit呈阳性，胞体和突起均明显着色，部分细胞发出长突起，并与相互连接成网络状(图1·1)。................图1一1小鼠小肠tICC胞体;ICC免疫荧光鉴定▲ICC突起

二、体外培养小鼠小肠!CC形态学特征体外培养小鼠小肠CIC24h后，倒置显微镜观察可见CIC已贴壁，细胞胞体呈三角形或梭形，有少量短突起(图1一2)。图1一2小鼠小肠cIC体外培养2h4的形态(lOOX)ICC体外培养72h后，倒置显微镜下可见CIC呈梭形、三角形，核大，核周有少量胞浆。自核区胞体发出2一一4条长突起，并可与邻近细胞胞体及CIC突起相互连接成网络状(图1一3)。图1一3小鼠小肠ICC体外培养72h的形态(400X)tICC;▲ICC突起

二、体外培养小鼠小肠!CC形态学特征体外培养小鼠小肠CIC24h后，倒置显微镜观察可见CIC已贴壁，细胞胞体呈三角形或梭形，有少量短突起(图1一2)。图1一2小鼠小肠cIC体外培养2h4的形态(lOOX)ICC体外培养72h后，倒置显微镜下可见CIC呈梭形、三角形，核大，核周有少量胞浆。自核区胞体发出2一一4条长突起，并可与邻近细胞胞体及CIC突起相互连接成网络状(图1一3)。图1一3小鼠小肠ICC体外培养72h的形态(400X)tICC;▲ICC突起
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本文编号：2847267