肝星状细胞溶酶体TPC2蛋白的表达及意义研究

发布时间：2020-10-22 22:18

　　 研究背景:肝纤维化是肝硬化的前期病变,各种原因引起的慢性肝病都可以引起肝纤维化。我国是慢性肝病人口大国,从这个角度来看肝纤维化的发生率较高,目前临床上仍仍缺乏抗肝纤维化疗效切确的药物。已有大量高质量的研究表明钙通道阻滞剂可抑制肝纤维化甚至逆转早期肝硬化,但其详细机制尚不明确。本研究的目的是探讨肝星状细胞溶酶体TPC2蛋白的表达及其对HSC活化、胶原表达的影响。方法:免疫蛋白印迹检测TGFβ1、PDGF及NAADP-TPC2通路阻滞剂Bafilomycin作用下肝星状细胞(HSC)溶酶体钙通道蛋白TPC2及肝星状细胞活化标志物a-SMA的表达,同时qRT-PCR检测胶原I mRNA的表达,然后共聚焦显微镜检测钙信号在促肝纤维化因子TGFβ1作用下的变化。结果:1.TGFβ1、PDGF刺激下肝星状细胞溶酶体钙通道蛋白TPC2表达下调,TGFβ1、PDGF刺激下HSC-lx2细胞胶原ⅠmRNA的表达上调,TPC2表达水平与TGFβ1诱导的胶原表达呈负相关;2.TGFβ1、PDGF及Bafilomycin刺激下TPC2表达下调,同时a-SMA的表达上调,TPC2及a-SMA的表达均表现为负相关关系;3.TGFβ1刺激条件下细胞内代表Ca2+水平的Fluo-3am 340nm/380nm荧光信号呈“双峰”样改变,提示TGFβ1刺激下出现了溶酶体钙动员的“Two pool”效应。结论:TPC2蛋白可能参与肝纤维化的发生机制,肝纤维化因子可通过下调TPC2的表达,活化肝星状细胞,诱导胶原的生成,进而导致肝纤维化的发生,TPC2可能是肝纤维化潜在的治疗靶点。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R575.2
【部分图文】：

图 1.1 western-blot 检测 HSC 在 TGFβ1、PDGF 刺激下 TPC2 的表达情况，P<0.01。Figure 1.1 Western blotting was used to detect the expression level of TPC2 of HSC under the stimulationof TGFβ1 and PDGF , P<0.01.图 1.2 荧光定量 PCR 检测肝星状细胞胶原的表达, P <0.01。Figure 1.2 qRT-PCR was used to determine the COL1A2 mRNA expression，P<0.01

图 1.1 western-blot 检测 HSC 在 TGFβ1、PDGF 刺激下 TPC2 的表达情况，P<0.01。Figure 1.1 Western blotting was used to detect the expression level of TPC2 of HSC under the stimulationof TGFβ1 and PDGF , P<0.01.

胞溶酶体 TPC2 蛋白的表达及意义研究 2018 届硕士表1 TGFβ1刺激下TPC2与Collagen I mRNA表达的相关性Control TGFβ1（2.5ng/ml） TGFβ1（5.0ng/ml） TGFβ1（1达量 1 0.8028±0.1598 0.5361±0.0664 0.443ImRNA 1 1.819±0.1660 1.984±0.3126 1.933-0.828 -0.902 -0.042*0.014*0注：*表示在 0.05 水平上相关,**表示在 0.01 水平上显著相关。
【参考文献】

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本文编号：2852160