抵抗素作为促炎因子对非酒精性脂肪肝病发生发展的影响

发布时间：2017-04-04 10:10

  本文关键词：抵抗素作为促炎因子对非酒精性脂肪肝病发生发展的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 模拟非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)体外及体内模型，通过观察抵抗素对肝酶学指标、细胞和组织形态学改变、核因子κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）、肿瘤坏死因子a（tumornecrosis factor-a，TNF-a）表达及纤维化指标的影响，探讨抵抗素作为促炎因子对NAFLD发生发展的影响。 方法 1.体外实验选用软脂酸诱导L02细胞脂肪变性模拟NAFLD体外模型。实验分为4组：C组（正常对照组）、P组（模型组：软脂酸20ug/ml）、CR组（重组人抵抗素50ug/l）和PR组（软脂酸20ug/ml+重组人抵抗素50ug/l）。各组给予相应处理72小时后,油红O染色观察细胞的脂变并测定细胞培养上清中甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）及谷氨酰转肽酶（GGT）的含量；采用半定量RT-PCR及Western blot法检测细胞胰岛素受体底物-2（IRS-2）、NF-κB、TNF-a的基因及蛋白表达水平。 2.体内实验 应用高脂饮食喂养Wistar大鼠建立NAFLD体内模型。健康雄性Wistar大鼠30只，随机分为正常对照组和模型组，各15只，分别给予普通饲料和高脂饲料喂养。分别于第15、18、21周末将对照组和模型组随机各处理5只。检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、 Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）、Ⅳ型胶原（CIV）、层粘连蛋白（LN）水平，，采用稳态模型评估法(HOMA)评估抵抗素抵抗（insulinresistance, IR）（HOMA-IR）；取肝组织HE、VG染色及电镜观察肝脏纤维化情况。RT-PCR法检测大鼠肝组织中抵抗素转录水平。 结果 1.选用软脂酸诱导L02细胞脂肪变性，成功建立NALFD体外模型。 （1）油红O染色观察：C组肝细胞边缘清晰，细胞核居中，未见明显橘红色脂滴形成；P组胞浆内可见橘红色脂滴；CR组胞浆内见少量橘红色脂滴；PR组见大量脂滴，脂滴不同程度融合。 （2）与C组比较，P组、CR组及PR组细胞培养上清中TG、ALT、AST、 GGT的含量升高。 2. RT-PCR及Western blot结果显示：与C组比较， P组、CR组及PR组NF-κB mRNA、TNFα mRNA相对表达量明显升高，而IRS-2mRNA明显降低（P值均＜0.05），差异有统计学意义。P组与CR组间比较（P值均＞0.05），差异无统计学意义。蛋白质相对表达量变化趋势同mRNA变化趋势。 3.肝组织形态学和血清学指标评价成功建立NAFLD体外模型。 (1)随着造模时间的延长，肝组织病理学观察大鼠肝脏脂肪变性及肝纤维化程度逐渐加重。 (2)NAFLD模型组HOMA-IR、PCⅢ、LN、CIV、HA随造模时间延长逐渐增加，均以21周时升高最为明显，与相应时相对照组比较差异具有统计学意义（P0.05或P0.01）。 4. RT-PCR结果示：resistin mRNA变化趋势同血清学各项指标。 5.Spearman相关性分析显示抵抗素与HOMA-IR、PCⅢ、LN、CIV、HA呈显著正相关（P0.05或P0.01）。 结论 抵抗素上调脂肪变性LO2细胞内NF-κB和TNF-a的表达，并且下调IRS-2的表达；随着造模时间的延长，大鼠肝组织抵抗素表达逐渐升高，并且与血清肝纤维化指标和IR成正相关，提示抵抗素可能通过NF-κB依赖途径发挥促炎和促IR作用并加快肝脏由炎症向肝纤维化进展。
【关键词】：抵抗素 非酒精性脂肪肝 核因子κB 肿瘤坏死因子a 肝纤维化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 第一部分 抵抗素对脂肪变性肝细胞核因子κB和肿瘤坏死因子a表达的影响16-30
• 前言16
• 1 材料与方法16-25
• 2 结果25-28
• 3 讨论28-30
• 第二部分 抵抗素在非酒精性脂肪肝病中对胰岛素抵抗和肝纤维化进展的影响30-38
• 前言30
• 1 材料与方法30-32
• 2 结果32-35
• 3 讨论35-38
• 全文小结38-39
• 参考文献39-44
• 附图44-46
• 文献综述：抵抗素及其在炎症性疾病中的作用研究进展46-57
• 参考文献51-57
• 致谢57-58
• 硕士期间发表论文58-59

【参考文献】

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本文编号：285351