肝硬化小鼠糖代谢及胰岛功能变化的研究

发布时间：2020-10-26 20:13

　　 目的:肝脏是重要的糖代谢器官之一,各种慢性肝病均可能致肝功能损伤,引发糖耐量减低,甚至糖尿病的出现,1906年Narmyn将这一类糖尿病定义为肝源性糖尿病(hepatogenous diabetes,HD)。据统计,慢性肝病患者中大约有约50%-80%的患者存在糖耐量异常,其中大约30%的患者最终发展为糖尿病,而正常人群中糖尿病发病率仅为8%左右。而HD的发病机制尚不明确,其临床表现又受原发肝病的影响,极易被忽视。但其具体机制尚不明确。本文通过小鼠胆总管结扎建立肝硬化模型,探究肝硬化时糖代谢及胰岛功能的变化、糖代谢关键酶活性的变化以及炎症因子的作用。方法:选取雄性6~8周龄大小的c57BL/6小鼠60只,随机分为6组,实验组(A1组)10只,实验组(A2组)10只,假手术组(B1组)10只,假术组(B2)10只,正常组(C1组)10只,正常组(C2)10只。在无菌条件下对A1、A2组小鼠打开腹腔行胆总管结扎,B1、B2组小鼠打开腹腔游离胆总管但不结扎,C1、C2组小鼠未开腹未处理胆总管。各组小鼠每周测定空腹血糖并称取体重,观察一般状态及尿液、粪便颜色。于4周时将A1、B1、C1组称取体重,测定糖耐量试验及胰岛素释放实验观察胰岛β细胞功能,用微板法测定血清谷草转氨酶(aspertate aminotransferase,AST)谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、甘油三酯(triglyceride,TG)、白蛋白浓度,肝脏HE、masson染色观察是否形成肝硬化,用ELISA法测定肝组织匀浆葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)、葡萄糖6磷酸酶(glucose 6 phosphatase,G6PC)的活性,用免疫组化法观察肝脏及胰腺是否有炎症因子的激活、损伤;于8周时将A2、B2、C2组小鼠与4周组同样处理。结果:实验4周时,1)实验A1组较B1组、C1组小鼠活动减少,耳尖及尾部明显黄染,尿液深黄,大便颜色变浅,皮毛略失去光泽,体重明显下降(P0.05);2)血清AST、ALT显著升高(P0.05),TG、白蛋白、肝重、OGTT曲线下面积尚无差别(P0.05),胰岛素释放实验曲线下面积显著增加(P0.05),肝组织HE、masson染色可见小胆管均扩张,胆管周围纤维条索形成,部分延伸至肝小叶,使肝小叶结构紊乱;3)肝组织匀浆GCK和G-6-PC活性尚无差别(P0.05);4)胰腺HE染色胰岛数目及面积有减少趋势,但无差别(P0.05),肝及胰腺组织NF-KB-P65和IKBα免疫组化可见部分细胞核呈棕色深染。实验8周时,1)实验组A2组较B2、C2组小鼠状态萎靡,全身明显黄染,尿液仍呈深黄色,大便呈浅白色,皮毛更无光泽,体重明显下降(P0.01);2)血清AST、ALT明显升高(P0.01),白蛋白显著下降(P0.01),肝重明显增加(P0.05),血脂仍无差别(P0.05),OGTT曲线下面积无差别(P0.05),胰岛素释放实验曲线下面积显著增加(P0.05),肝组织HE、masson染色可见胆管明显扩张,周围明显纤维化,可见假小叶及肝细胞片状坏死;3)肝组织匀浆G-6-PC活性显著增高(P0.05),GCK活性有下降趋势,但无差别(P0.05);4)胰腺HE染色可见胰岛数目及面积减小(P0.05),肝及胰腺组织NF-KB-P65和IKBα免疫组化可见棕色深染细胞核增多,NF-KB-P65/IKBα比值明显升高(P0.05)。结论:小鼠胆总管结扎建立肝硬化模型于4W出现胰岛素抵抗,随着肝硬化的进展,可使调节糖代谢的关键酶G-6-PC活性升高,并激活NF-KB信号通路,使肝脏、胰腺出现炎症反应,胰岛面积逐渐减少。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R575.2
【部分图文】：

图 9 造模术后 4 周各组小鼠体重变化验 4 周各组小鼠体重及肝重变化的比较（ x±S）实验组（A1） 假术组（B1） 正22.350±0.832 22.340±1.299 2220.630±1.639★＃22.880±1.135 231.330±0.106 1.210±0.159 1P<0.05 vs B1 组；＃：P<0.05 vs A1 造模前体重。鼠肝功、血脂、白蛋白的变化鼠于实验 4 周行尾静脉采血测定 OGTT 及胰岛素分别测定肝酶 AST、ALT、TG、白蛋白浓度。实均有升高，ALT 明显升高（P<0.01）,白蛋白及 1 均无明显变化。上诉结果表明胆总管结扎术后

注：★：P<0.01 vs B1 组、C1 组；＃：P<0.05 vs B1 组、C1 组。2.2.3 实验 4 周各组小鼠肝脏组织 HE 及马松染色A1、B1、C1 3 组小鼠均于实验 4 周心脏采血后立即切取肝脏组织浸尔马林液中，石蜡包埋做成蜡块，切片后分别行 HE 染色及 masson 染色察 HE 染片示：实验组 A1 小胆管均有轻度扩张，周围可见纤维条索，部叶，使肝小叶结构紊乱，局部可见肝细胞坏死。假手术组 B1 及正常组 C索状整齐排列，结构完整，未见胆管扩张，无纤维化，无肝细胞坏死。masson 染色对胶原纤维可以着色，可将纤维化染成浅绿色。显微镜组小鼠肝脏组织肝小叶局部及胆管周围可见着色，B1 及 C1 组小鼠肝脏齐排列，胞浆染成深红色，未见浅绿色着色。见图 10 至 15。上诉结果说明在实验 4 周，实验组肝组织已有肝小叶的破坏，胆管小叶局部有肝细胞破坏及明显纤维条索形成。

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【参考文献】

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1 Maria Teresa Arias-Loste;Maria Teresa García-Unzueta;Susana Llerena;Paula Iruzubieta;Angela Puente;Joaquín Cabezas;Carmen Alonso;Antonio Cuadrado;José Antonio Amado;Javier Crespo;Emilio Fábrega;;Plasma betatrophin levels in patients with liver cirrhosis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年37期

2 Cho Naing;Joon Wah Mak;Syed Imran Ahmed;Mala Maung;;Relationship between hepatitis C virus infection and type 2 diabetes mellitus:Meta-analysis[J];World Journal of Gastroenterology;2012年14期

3 Takumi Kawaguchi;Eitaro Taniguchi;Minoru Itou;Masahiro Sakata;Shuji Sumie;Michio Sata;;Insulin resistance and chronic liver disease[J];World Journal of Hepatology;2011年05期

4 刘淑娥,肖丹;肝源性糖尿病临床分析[J];中日友好医院学报;2003年03期

本文编号：2857475