胃黏膜损伤的细胞增殖的相关研究

发布时间：2020-10-31 17:34

　　 第一部分槲皮素对抗慢性饮酒大鼠胃黏膜细胞过度增殖的作用 目的:研究食物中一种主要的黄酮类物质——槲皮素对抗慢性饮酒引起胃黏膜过度增生的作用及其机制。 方法:40只雄性SD大鼠(200～250g)随机分为4组:对照组(饮用自来水)、酒精处理组(以6%酒精作为唯一饮用水来源)、槲皮素处理组(每天100mg/kg槲皮素灌胃)和酒精+槲皮素组(饮酒的同时每天100mg/kg槲皮素灌胃)。免疫印迹法测定增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D_1(Cyclin D_1)表达以检测大鼠胃黏膜的细胞增殖。TBARS水平、蛋白羰基含量被用来作为胃黏膜氧化损伤的指标。硝酸盐/亚硝酸盐水平、硝基酪氨酸水平被用来检测胃黏膜NO的产生量。同时也用免疫印迹法检测了iNOS和nNOS的表达。 结果:和对照组相比,酒精处理7天的大鼠胃黏膜细胞增殖显著增加,同时伴有脂质过氧化和蛋白质氧化水平增高、NO产生量降低和nNOS活性降低。这些作用可被槲皮素部分反转。 结论:槲皮素可对抗慢性饮酒引起的胃黏膜细胞过度增生。这种作用是其消除自由基引起的,此外,还可能与其增强nNOS活性、增加NO产生有关。 第二部分外源性间充质干细胞在损伤胃黏膜内的增殖及其作用 目的:研究体外培养和扩增的骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cells,BMMSCs)对损伤胃黏膜修复的促进作用。 方法:体外培养扩增β-gal转基因小鼠的骨髓MSCs细胞。健康雄性C57BL/6小鼠(体重18～22g),90只,随机分为对照组和实验组,实验组又分为移植和非移植组,每组30只。实验组用0.2ml纯酒精灌胃,造成胃损伤模型。酒精灌胃2 h后,移植组小鼠经尾静脉注射MSCs(0.5×10~6/只);非移植组小鼠尾静脉注射和移植组同体积的PBS。对照组小鼠0.2ml生理盐水灌胃2 h后,经尾静脉注射MSCs(0.5×10~6/只)进行细胞移植。溃疡指数评分评价胃黏膜损伤的程度。免疫组化检测Brdu阳性细胞评价细胞增殖。β-gal阳性细胞评价MSCs细胞的数量及分布。Brdu-β-gal免疫双重染色评价MSCs细胞的增殖。植物血凝素UEA-1和β-gal双重染色评价MSCs细胞的分化。 结果:MSCs移植后,在损伤胃黏膜可发现MSCs聚集于损伤部位,并大量增殖,可分化为胃黏膜上皮细胞;而在未损伤胃黏膜仅发现有少量MSCs细胞散在分布,未发现有MSCs细胞分化而来的胃黏膜上皮细胞。酒精诱导胃黏膜损伤后,MSCs移植组的损伤指数较未移植组显著降低。 结论:静脉注射MSCs细胞可聚集于胃黏膜损伤部位,MSCs细胞可在损伤的胃黏膜内增殖分化并加快损伤胃黏膜的修复过程。
【学位单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2008
【中图分类】：R573
【部分图文】：

结果1.姗皮素抑制酒精诱导的胃私膜细胞过度增殖蛋白免疫印迹结果显示，饮酒大鼠胃私膜中PCNA和CychnDI两种蛋白的表达量较对照组显著增加(P<0.01);而料皮素和酒精处理后较酒精组显著降低(图1)(P<0.05)。我们用免疫组化方法和计算机图像分析进一步确认，在慢性饮酒7天后，大鼠胃底腺的PCNA阳性细胞数较对照组显著增多(P<0.01);而酒精+姗皮素处理组较酒精组显著减少(P<0.05)，而酒精+概皮素组与橱皮素组和对照组三组的PCNA阳性细胞数量相近(图2，O、、.了11.表E+Q一

正常小鼠酒精处理后引起了3一NT的显著降低，而联合应用酒精和料皮素又使3一NT水平显著回升，单独料皮素处理组3一NT水平较对照组轻度升高。这说明树皮素抑制了酒精诱导的3一NT的降低，与胃彩膜中峭酸盐/亚硝酸盐水平及nNOS表达结果一致。表2大鼠胃私膜中Nox和NT的含量(x幻)ControlEthanolEthanol+QuercetinQuereetinNox(林mol/L)一33士0.477.98士0.33’9.59士0.62#12.1肚0.52Nitrotyrosine(林mo一zL)5.99士一356.85士0.46‘8.07士一21#10.85士一03与酒精组比较，‘尸<0.05;与对照组比较争<0.01。

结果1.体外培养的MSCs生物学特征1.1MSCs体外培养的形态学及生长特点MSCs采用全骨髓贴壁方法培养，原代培养细胞形态多样复杂，成梭形、扁平形、多角形等，为不均质细胞，3天后可观察到集落形成;随着细胞传代的进行，梭形细胞逐渐增多并占主导优势，而非均质细胞逐渐减少;传至第三代时，细胞形态较为均一，多数成典型的纺锤样成纤维细胞形态，细胞生长状态良好，达融合时成辐射状或漩涡状集落排歹，」(如图l)。
【引证文献】

相关博士学位论文 前1条

1 孙雪莲;黄芪苷对胃粘膜损伤的保护作用研究[D];广州中医药大学;2011年

本文编号：2864274