硫化氢抑制ATF6-CHOP基因表达对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

发布时间：2020-10-31 18:37

　　 目的：研究硫化氢在大鼠肝脏缺血再灌注损伤（Ischemia Reperfusion，IR）中的保护作用及机制。 方法：通过肝动脉结扎术构建大鼠缺血再灌注损伤模型，依次分为假手术组(Sham组)，缺血再灌注损伤组（IR组）及缺血再灌输损伤+硫化氢保护组（IR+NaHS组）；以TUNEL原位染色及流式细胞仪分析三组动物模型的肝细胞凋亡情况，检测肝细胞损伤指标ALT浓度，Real time-PCR、Western blots分析外源性硫化氢对内质网应急（Endoplasmic reticulum stress，ERS）信号通路关键分子活化转录因子6（activating transcription factor6，ATF6）及促凋亡分子CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein, CHOP)基因m RNA和蛋白表达的影响。 结果：TUNEL原位凋亡及流式细胞仪分析结果显示，IR组大鼠肝细胞凋亡较假手术组明显增加（P 0.05），而IR+NaHS组大鼠肝细胞凋亡较IR组明显减少（P 0.05）；大鼠肝细胞损伤标志物谷丙转氨酶ALT在IR组较假手术组明显增加，但IR+NaHS组较IR组大鼠血清中ALT下降明显，差异有统计学意义；IR组大鼠肝组织ATF6、CHOP mRNA及蛋白表达较假手术组明显增加，IR+NaHS组ATF6及CHOP mRNA及蛋白表达较IR组明显减少（P 0.05）。 结论：成功构建SD大鼠肝脏缺血再灌注损伤的模型；硫化氢通过抑制内质网应急关键信号通道ATF6-CHOP基因表达，进而产生对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。
【学位单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2014
【中图分类】：R575
【部分图文】：

162.5 技术路线图2.6 统计学方法计量资料以均数±标准差（mean ± SEM）表示，随机区组方差分析、Student’s t 检验分析各实验组大鼠数据变量，以 α =0.05 作为统计学检验水准。统计分析采用 SPSS 16.0 软件包（SPSS Inc., Chicago, IL, USA）进行数据分析。

19图 2表 2 大鼠肝脏细胞悬液流式细胞仪（Annexin+PI）凋亡分析（凋亡率 x—±组别 6h(N=7) 12h(N=7)Sham 组 1.24±0.021 1.53±0.34IR 组 24.53±2.58 32.43±7.29IR-NaHS 组 19.14±3.56* 15.05±2.25#F 125.571 73.901P ＜0.0001 ＜0.0001* vs IR, P=0.04 # vs IR, P＜0.00011 .TUNEL 原位凋亡染色分析 Sham(A，E），IR 组（B，F）和 IR-NaHS

图 3 三组大鼠缺血再灌注损伤 6h、12h 后血清中 ALT 浓度。 H2S 抑制大鼠缺血再灌注损伤肝组织中 ATF6-CHOP mRNA 和达TF6-CHOP 是内质网应急及凋亡相关信号通道的关键分子，通过对大鼠注损伤 6h、12h 后肝组织中 ATF6，CHOP mRNA 和蛋白表达进行研究，e-PCR 检测结果显示，在 IR 组 12h 后 ATF6 mRNA 定量分析较 Sham 组。IR-NaHS 大鼠肝细胞中 ATF6 mRNA 表达较 IR 组呈减少趋势。在 IROP mRNA 表达量较 Sham 组明显增加，而 IR-NaHS 组大鼠肝细胞中 CNA 表达量较 IR 组显著减少（* P < 0.05）。详见图 4A、表 4。Western bl组大鼠肝细胞中 ATF6，CHOP 蛋白的表达与其 mRNA 表达一致，见图。别 例数ATF6 CHOP6h 12h 6h m 组 7 32249.26±727.02 ▽27068.68±3537.65▽28009.949±14748.7721924.6
【参考文献】

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本文编号：2864342