Toll样受体4与β防御素2在结肠炎上皮表达及调控的研究

发布时间：2020-10-31 19:32

　　 目的 正常肠上皮作为物理屏障限制肠道微生物入侵宿主。肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells，IEC)极低表达TLR4和MD2，不与脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)反应。同时也产生许多效应分子抵御腔内微生物，维持天然防御反应。抗菌肽-如人类β防御素2(human β-defensin 2，HBD2)便是其中一类，其表达受细菌感染和促炎因子的调控。本研究以细胞因子TNF-α、IL-β、IFN-γ及LPS刺激HT-29结肠癌细胞系后，探讨HT-29细胞TLR4、MD2及HBD2在转录和蛋白水平的表达变化，及其与NF-κB激活的关系。 材料和方法 1 HT-29细胞分为8组，分别加入RPMI1640、TNF-α(20ng／ml)、IL-1β(20ng／ml)、IFN-γ(20ng／ml)、LPS(50ng／ml)、TNF-α(20ng／ml)+LPS(50ng／ml)、IL-1β(20ng／ml)+LPS(50ng／ml)、IFN-γ(20ng／ml)+LPS(50ng／ml)干预。 2 ELISA方法测定各组HT-29细胞上清液IL-8水平。 3 RT-PCR方法检测各组HT-29细胞TLR4、MD2、HBD2 mRNA表达。 4 免疫印迹方法检测各组HT-29细胞TLR4和NF-κB蛋白表达。 结果 1 细胞因子和细胞因子加LPS组上清液IL-8的表达显著高于对照组(p＜0.01)：HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激，IL-8的表达进一步升高(p＜0.01)。 2 细胞因子和细胞因子加LPS显著上调HT-29细胞TLR4和MD2mRNA的表达
【学位单位】：四川大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R574.62
【部分图文】：

p<.005;**vs对照组，p<0.01.33免疫印迹法测定TLR4与NF一KB在各组H-T29细胞中的表达33.1TLR4在各组H-T29细胞中的表达(图1一3，表1一3)图1一3.TLR4蛋白在H-T”细胞中的表达表1一3.TLR4蛋白在各组H-T29细胞中的表达组别H不29(一)TNF一aIL一lpINF一YLPSLPS+丁NF一aLPS+IL一lpLPS+INF一y灰度值(mean土SD)2174士672575士306二270.9士4.5二253叶8.2.*2236士24.3254.6土244*.249.肚227**255.叶227****vs.对照组，p<0.013.3.1.1NTF一a、IL一lp、IFN一Y、LPS+INF一a、LPS+IL一lp、LpS+IFN一丫组TLR4的表达明显高于对照和LPS组，p<0.01。2!

.3对照与LPS组TLR4的表达无统计学差异，p>.005。.3.32NF一KB蛋白在各组H-T29细胞胞核中的表达(图1一4，表1一4)图1一4.NF一KB蛋白在H-T29细胞胞核中的表达表1一4.NF一KB蛋白在各组H-T29细胞胞核中的表达灰度谊(均数士标准差)H-T29卜)2375土10230275士2833158士!12IFNy3092土129LPS+INF一u2712士2」23569士129LPS，IL一lp3625士196LPS+IFN一Y3750士2353.3.2.ITNF一a、IL一lp、IFN一丫、LpS、LPS+TNF一a、LPS+IL一lp、LPS+IFN一丫组NF一KB的表达明显高于阴性对照，p<.001。3.3.2‘2LPs+州F一a、Lps+IL一lp、LpS+IFN一丫组NF一KB的表达显著高于NTF一a、IL一lp、IFN一丫、LPS组，夕<0.05。3.3.2.3NTF一a、LI一lp、FIN一了组NF一KB的表达显著高于LPS组，p<.005。3.3.2.4T’NF一。、LI一lp、FIN一Y组NF一KB的表达无显著差异，p>.005。3.3.2.5LPS+NTF一。、LPs十LI一lp、LPs十FIN一Y组NF一KB的表达无显著差异，P>0.05。讨论肠上皮细胞是宿主粘膜屏障重要的组成部分。肠上皮一方面必须对存在的天然菌群保持“沉默”

A组(夕<0.05)。3.3各组结肠上皮GAPDHmRNA的表达无显著差异P(>0.05)。4免疫印迹测定各组小鼠结肠粘膜TLR4蛋白的表达(图2一S，表2一8)图2一5.TLR4蛋白在小鼠结肠上皮中的表达42
【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 欧阳钦,潘国宗,温忠慧,万学红,胡仁伟,林三仁,胡品津;对炎症性肠病诊断治疗规范的建议[J];中华消化杂志;2001年04期

本文编号：2864407