MTHFR、IL-10、ALDH2基因多态性与HBV感染后疾病转归的研究

发布时间：2020-11-11 19:01

　　 人体感染HBV后病程如何演化是宿主和病毒等多种因素共同作用的结果,宿主基因的多态性可能会影响HBV感染后的疾病进程。基因多态性有较强的地域和民族特征,而且其与肝病之间的关系在不同地区和民族之间的研究结果不尽相同。因此,分析MTHFR、IL-10、ALDH2基因多态性对天津地区汉族人感染HBV后疾病进展的影响,有助于对本地区肝病发生的病因学进行深入研究。 研究目的：探讨MTHFR、IL-10、ALDH2基因多态性与HBV感染后疾病转归的关系。 研究方法：收集标本995例,包括205例健康对照、161例自愈者、221例慢乙肝患者、172例乙肝肝硬化患者以及236例HBV相关性肝癌患者。从凝血块中提取基因组DNA,采用TaqMan SNP基因分型和基因测序的方法检测MTHFR 677 C/T、IL-10-1082 A/G、-819 T/C和ALDH2 rs4646778 C/A、rs671 G/A等5个位点的多态性,以χ2检验分析以上位点的基因型、等位基因以及IL-10-1082/-819、ALDH2 rs4646778/rs671单倍型在各组中的分布及差异。 研究结果：1. MTHFR基因：用于本基因研究的805例研究对象677 CT、TT和CC基因型频率分别为47.09%、30.43%和22.48%；等位基因频率：C为46.02%,T为53.98%,显示天津地区汉族人TT基因型和T等位基因频率明显高于以往其它地区或种族的报道。等位基因和基因型分布在各组无统计学差异(P0.05)。分析不同性别在各组中的分布特征表明,TT基因型在男性各患病组中显示风险度降低,特别在肝硬化组TT和CT的OR值最低；而在女性的自愈、慢乙肝和肝硬化组,TT和CT显示风险度增加,特别在肝硬化组OR值最高,具有统计学差异(P=0.022)。然而,TT和CT在女性肝癌组却显示风险度降低。对不同临床特征包括肝癌和肝硬化组的Child-Pugh肝功能分级、AFP水平以及所有患者HBsAg表达、DNA拷贝数之间的比较未发现统计学差异(P0.05)。2.IL-10基因：用于本基因研究的700例研究对象-1082位点的基因型分布为AA占82.29%、AG占16.00%、GG占1.71%；等位基因频率：A为90.29%,G为9.71%。-819位点的基因型分布为TT占41.43%、TC占48.14%、CC占10.43%；等位基因频率：T为65.64%,C为34.36%。两位点等位基因和基因型分布在各组之间比较均无统计学差异(P0.05),以自愈组为对照,-1082 AG基因型和G等位基因对慢乙肝和肝硬化组的风险度降低,-819 TC对肝癌组风险度降低,CC基因型和C等位基因对三个肝病组的风险度均有降低的趋势。分析IL-10-1082／-819单倍型在各组中的分布,以健康和自愈组为对照,AC单倍型对肝硬化和肝癌组的风险度均降低,且以自愈组为对照时降低程度更大；以自愈组为对照,GC单倍型对慢乙肝和肝硬化组的风险度降低。在不同临床特征的组别之间比较发现,对于-819位点,DNA103拷贝／mL的患者C等位基因频率显著高于DNA≥103拷贝／mL的患者(P=0.025)。对其它各项的比较未发现统计学差异(P0.05)。3. ALDH2基因：用于本基因研究的180例研究对象rs4646778位点CC、CA和AA基因型频率分别为51.11%、37.78%和11.11%；等位基因频率：C为70.00%,A为30.00%。rs671位点GG、GA和AA的基因型频率分别为72.22%、24.45%和3.33%；等位基因频率：G为84.44%,A为15.56%。两位点等位基因和基因型分布在各组无统计学差异(P0.05),以健康组为对照,rs4646778 CA基因型对三个肝病组的风险度均降低,C等位基因对肝癌组的风险度降低。分析rs4646778/rs671单倍型在各组中的分布,以健康组为对照,AG和CA单倍型对三个肝病组的风险度均有降低的趋势。在不同临床特征的组别之间比较未发现统计学差异(P0.05)。 研究结论：1. MTHFR 677在中国天津汉族人中的TT基因型频率明显高于大多数国家和地区的研究结果。同时提示MTHFR 677 TT和CT基因型降低男性HBV感染者患肝硬化的风险和女性HBV感染者患肝癌的风险,而增加女性HBV感染者患肝硬化的风险。2.IL-10-1082AG基因型和G等位基因,-819 TC、CC基因型和C等位基因,-1082/-819AC、GC单倍型对HBV感染后疾病进展有一定的保护作用；-819 C等位基因更有利于HBV感染者病毒的清除。3. ALDH2 rs4646778 CA基因型、C等位基因以及rs4646778/rs671 AG和CA单倍型对HBV感染后疾病进展可能有一定的保护作用。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R512.62
【部分图文】：

0.0562.0510.0030.6950.0082.0502.5472.6090.592.4582.0352.700.0182.5572.690一0000.9790.9130.0032.733八U︶，‘40少，、八一，勺了‘J︻百‘矛0︸，‘lF2.6472.331G2.7111.677H1.9412.744翼彝:阴性对照;仁二〕:空白对照;甚困:阳性对照;字体加粗:HBcAb阳性本结果临界值为(0.981+1.257+0.579)z3xo.5=0.5195。90例样本中阳性标本(A值夕洽界值0.5195)17例，阴性标本(A值>临界值0.5195)73例。用此方法共从健康查体中筛检出乙肝自愈者161例。2.3基因组DNA的提取分光光度仪测定基因组DNA的核酸含量及纯度。样本的核酸含量平均在500一80On岁川之间，A260/280大多数均能达到大于1.7的核酸纯度要求。1.5%琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取情况，可见清晰的DNA条带，表明满足PCR反应需要(见图l)。

图4ALDH2rs4646778、rs671位点PCR扩增及SNP分析图A.ALDHZrs4646778PCR扩增图;B.ALDHZrs4646778SNP分析图C.ALDHZrs671PCR扩增图;D.ALDHZrs671SNP分析图.:rs4646778AA或rs671AA基因型;今:rs4646778CC或rs671GG基因型;▲:rs4646778AC或rs671AG基因型2.4.3MTHFR和IL一10基因测序为验证几qMansNP基因分型方法的准确性，随机挑取MTHFR677CC、TT、CT3种基因型各10个共30个样品和IL一10一1082/一819不同基因型和单倍型的25个样品进行DNA测序，并对IL一10一1082/一819的4个杂合子样品进行克隆，每个样品再挑取5个克隆测序。测序结果见图5、6。如图5所示，A、B、C分别代表MTHFR677CC、TT和CT基因型。图6显示IL一10一1082/一819基因测序的结果:图中A、B、C、D、E分别代表IL一10一1082八819AG/CT、AA/TT、GG/CC、AA/CC和GG/TT基因型。测序结果与TaqManSNP基因分型结果完全一致。
【参考文献】

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本文编号：2879605