内质网应激调控NADPH氧化酶表达在克罗恩病中的作用与机制研究

发布时间：2020-11-14 23:13

　　 目的:本研究旨在初步探讨内质网应激(Endoplasmic reticulum Stress,ERS)调控NADPH氧化酶的表达在克罗恩病的作用及可能机制,为治疗和预防相关疾病及其并发症提供了新的治疗依据以及思路。方法:1.选取克罗恩病(Crohn's disease,CD)病人手术标本10份作为实验组,再选取结肠癌病人癌旁肠黏膜的手术标本10份作为对照组,Masson染色以观察肠组织病理变化,以及纤维化程度。2.免疫组织化学的方法检测肠道标本中ERS相关蛋白GRP78蛋白和氧化应激(Oxidative Stress,OS)相关蛋白P47 PHOX蛋白的表达情况。3.在CD组中,对Masson纤维化程度和GRP78蛋白、P47 PHOX蛋白的表达分别进行相关性分析。4.在离体培养的肠上皮细胞,观察衣霉素(Tunicamycin,Tm)刺激细胞后Western blot检测GRP78和P47 PHOX蛋白表达的情况,以及不同浓度的4-苯基丁酸钠盐(Sodium 4-phenylbutyrate,4PBA)是否可以抑制GRP78和P47 PHOX蛋白表达。5.分别抑制ERS不同通路IRE1α-XBP1S,IRE1α-TRAF2-JNK,PERK-eIF2α,检测P47 PHOX蛋白表达的情况。结果:1.Masson染色检测CD病人肠组织标本纤维化程度较对照组增加。2.在免疫组化检测中,与结肠癌癌旁肠黏膜标本比较,CD肠黏膜标本GRP78和P47 PHOX表达明显升高。3.在CD组中,Masson纤维化程度和GRP78蛋白、P47 PHOX蛋白的表达均有较强的正相关性。4.在离体的细胞中Tm诱导ERS的发生,GRP78蛋白、P47 PHOX蛋白表达增加,而4PBA可以抑制上述蛋白的表达。5.抑制IRE1α-TRAF2-JNK,PERK-eIF2α途径均可以使P47 PHOX蛋白下调,而抑制IRE1α-XBP1S使P47 PHOX蛋白的表达上调。结论:1.GRP78、P47 PHOX在CD病中表达明显增加,且与纤维化程度呈正相关,提示ERS可能通过上调OS,参与CD的发病。2.ERS可能通过IRE1α-TRAF2-JNK,PERK-eIF2α途径正向诱导OS,而IRE1α-XBP1S途径起负向调节作用。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R574
【部分图文】：

13图 3.1 Masson 染色检测各肠组织手术标本纤维化程度肠黏膜组 Masson 染色纤维化程度较轻；（B）克罗恩纤维化程度严重；A、B 放大倍数为 40 倍

14图 3.2 免疫组化检测 GRP78 和 P47 PHOX 蛋白在肠组织手术标本中的表达（A）GRP78 在癌旁肠黏膜组表达；（B） GRP78 在克罗恩病组肠黏膜表达；（C） P47 PHOX 在癌旁肠黏膜组表达；（D） P47 PHOX 在克罗恩病组肠黏膜表达。A、B、C、D 放大倍数为 400 倍

15图 3.3 克罗恩病组中肠组织纤维化程度分别与 GRP78、P47 PHOX 蛋（A）肠黏膜纤维化程度和 GRP78 IOD 表达呈正相关（r=0.985）膜纤维化程度和 P47 PHOX IOD 表达呈正相关（r=0.935）
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本文编号：2884061